一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法技术

本发明专利技术提供了一种FaPEx‑TD‑ESI‑MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，首先对肉类样品进行前处理：称取肉类样品，加入盐酸溶液震荡，然后加入醋酸乙腈溶液震荡，再离心，萃取液于FaVEx快速过滤柱中过滤，移取过滤液氮吹至近干，定容后，形成样品溶液；由样品溶液与对照品溶液是否具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，以及待测物的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比是否一致，判断样品中是否存在对照品中的化合物，即样品中是否含有瘦肉精。本发明专利技术将FaVEx快速过滤柱和TD‑ESI‑MS/MS技术有效结合，且有效地缩短了前处理时间，有机试剂用量少，对环境污染小，具有快速、准确、简便、耐用和低成本的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法
本专利技术属于食品检测
，具体涉及一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法。
技术介绍
“瘦肉精”是指具有相似结构的β-受体激动剂，临床上用于治疗哮喘、休克等疾病。该类药物能够促进动物生长，并显著提高瘦肉率，为了迎合消费需求，常被非法添加在畜禽肉中。为此，农业部235号公告明确规定，动物源性食品中不得检出β-受体激动剂。热解吸-电喷雾-原位质谱仪(TD-ESI-MS/MS)是目前比较先进的质谱技术之一，其优势在于使用探针取样直接检测，不受样品状态影响，没有记忆效应，操作时只通过简单的金属探针接触固体表面或液体样品采集待测物，以高温加热的方式完成探针表面吸附物质的解吸过程，解吸后的气相物质分子经载气流轨道收束并吹送至电喷雾区域，完成离子化过程，最终进入三重四极杆质谱检测器分析，适用于现场的快速筛查。该方法现已应用于食品质量安全检测、果蔬中农药残留、保健食品非法添加物等方面的研究，但在畜禽肉中兽药残留的应用未见相关报道。目前检测β-受体激动剂最常用的方法有免疫分析法和仪器分析法。免疫分析法最常用的有酶联免疫法和胶体金免疫层析法，酶联免疫法的原理是待测样品中的β-受体激动剂类药物残留与微孔包被的抗原共同竞争特异性抗体；胶体金免疫层析法是一种利用胶体金颗粒作为标记物简单快速的免疫分析方法，其最关键的是制备出特异性强和纯度高的单克隆抗体，使用原理是将人工合成的抗原先固定于条状纤维层析材料的试纸条上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，样品溶液借助毛细作用在试纸条上移动，待测物与人工合成的抗原竞争结合胶体金标记的抗体，并直接以颜色显示检测结果；胶体金免疫层析法目前主要用在液体样品检测中，在肉制品中应用不多，其灵敏度和准确度不及酶联免疫法。仪器分析法最常用的有气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)，色谱质谱技术联用，可以对待测物进行有效的分离，是一种高灵敏度、高准确性的检测方法。胶体金免疫层析法适用于大量样品的快速筛查，但是检测结果受环境和人为因素影响而存在差异，并且无法定量分析；酶联免疫法专一性和重现性无法得到有效保障，假阳性较多；虽然免疫法操作简单、使用成本不高，在检测中能快速测量大批量样品，但免疫学存在交叉反应现象仍然是制约其应用的主要问题，而且受厂家生产试剂质量影响，有可能抗体批次不同，测定结果也会出现差异；另外在同类药物多残留检测方法方面也有其不能所及之处，不能用于国家相关执法仲裁检验。胶体金免疫层析法、酶联免疫法均为快速检测方法，适用于前端的快速筛查，其定性分析的准确度和定量分析的灵敏度均不及GC-MS和LC-MS法。GC-MS和LC-MS法以其较高的灵敏度和专属性作为最常用的国标检测方法，GC-MS需要对样品进行衍生，衍生耗时长且过程不易控制，造成衍生程度不同，进而影响定量准确性；因而目前国标主流的检测方法为LC-MS，以两种国标为例分析，GB/T21313-2007《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》样品需要经过双柱净化、同时用基质加标配置标准曲线，整个实验过程繁琐，增加试剂消耗以及人力消耗，人员操作差异大，实验平行性难以得到有效保证；GB/T22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》需要两次调节pH，用MCX阳离子交换柱净化，内标法校正，固相萃取法一般经过活化、上样、淋洗、洗脱等过程，提取溶剂异丙醇：乙酸乙酯的＝6：4(v/v)不易挥发，增加了实验耗时和溶剂消耗。
技术实现思路
针对现有技术中存在不足，本专利技术提供了一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，缩短前处理时间、试剂用量少、缩短了仪器分析时间，能够快速准确简便的检测肉类中的瘦肉精。本专利技术是通过以下技术手段实现上述技术目的的。一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，具体为：建立前处理：称取肉类样品，加入盐酸溶液震荡，然后加入醋酸乙腈溶液震荡，再离心，萃取液于FaVEx快速过滤柱中过滤，移取过滤液氮吹至近干，定容后，形成样品溶液；所述样品与盐酸溶液的用量比为2g：1mL，样品与醋酸乙腈溶液的量比为2g：10mL；所述定容采用0.1甲酸水-甲醇(95:5)；设置TD-ESI-MS条件：包括注射泵溶剂、注射泵流速、热解吸温度、雾化器压力、毛细管电压、干燥气温度和干燥气流速；所述注射泵溶剂为0.1％甲酸水溶液-甲醇(1:1，V:V)，注射泵流速为100～200μL/h，所述雾化器压力为1psi或3psi或5psi；定性分析：将混合对照品溶液移取至探针表面取样环，探针插入加热管，高温解吸探针表面物质，待测物离子化，进入质谱仪检测分析；若样品溶液与对照品溶液具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，且待测物的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比相一致，样品中存在对照品中的化合物，即样品中含有瘦肉精；所述解吸温度为260-300℃。进一步的，还包括半定量分析：移取混合标准中间溶液至肉类空白基质中，作为基质加标液，并进行前处理，取基质加标液和待测物于探针表面取样环，探针插入加热管，进入质谱仪检测分析，获取样品溶液的待测物浓度，确定样品中化合物的含量。进一步的，所述注射泵流速为150μL/h，所述雾化器压力为3psi，所述解吸温度为280℃，所述盐酸溶液的浓度为0.05mol/L，所述醋酸乙腈溶液的浓度为1％。本专利技术的有益效果为：本专利技术将FaVEx快速过滤柱和TD-ESI-MS/MS技术有效结合，建立了肉类中瘦肉精的快速分析方法，该方法不仅有效缩短了前处理时间，而且有机试剂用量少，废弃物少，对环境污染小；本专利技术缩短了仪器分析时间，不需要色谱分离，实时得到检测结果。本专利技术方法不仅快速、准确，而且兼顾简便、耐用和低成本的优势，适合肉类中瘦肉精的定性和半定量分析。附图说明图1为本专利技术所述热解吸-电喷雾离子源工作原理图；图2为本专利技术中不同热解吸温度对响应强度的影响对比图，图2(a)为热解吸温度260℃b对响应强度的影响图，图2(b)为热解吸温度280℃对响应强度的影响图，图2(c)为热解吸温度300℃对响应强度的影响图；图3为本专利技术中不同雾化器压力对响应强度的影响对比图，图3(a)为雾化器压力1psi对响应强度的影响图，图3(b)为雾化器压力3psi对响应强度的影响图，图3(c)为雾化器压力5psi对响应强度的影响图；图4为本专利技术猪肉中4种β-受体激动剂重复性图谱，图4(a)为6个猪肉加标样品连续测定得到的总离子流图，图4(b)为莱克多巴胺的第一对碎片离子对的MRM谱图，图4(c)为莱克多巴胺的第二对碎片离子对的MRM谱图，图4(d)为沙丁胺醇的第一对碎片离子对的MRM谱图，图4(e)为沙丁胺醇的第二对碎片离子对的MRM谱图，图4(f)为特布他林的第一对碎片离子对的MRM谱图，图4(g)为特布他林的第本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，其特征在于：/n建立前处理：称取肉类样品，加入盐酸溶液震荡，然后加入醋酸乙腈溶液震荡，再离心，萃取液于FaVEx快速过滤柱中过滤，移取过滤液氮吹至近干，定容后，形成样品溶液；所述样品与盐酸溶液的用量比为2g：1mL，样品与醋酸乙腈溶液的量比为2g：10mL；所述定容采用0.1甲酸水-甲醇(95:5)；/n设置TD-ESI-MS条件：包括注射泵溶剂、注射泵流速、热解吸温度、雾化器压力、毛细管电压、干燥气温度和干燥气流速；所述注射泵溶剂为0.1％甲酸水溶液-甲醇(1:1，V:V)，注射泵流速为100～200μL/h，所述雾化器压力为1psi或3psi或5psi；/n定性分析：将混合对照品溶液移取至探针表面取样环，探针插入加热管，高温解吸探针表面物质，待测物离子化，进入质谱仪检测分析；若样品溶液与对照品溶液具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，且待测物的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比相一致，样品中存在对照品中的化合物，即样品中含有瘦肉精；所述解吸温度为260-300℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种FaPEx-TD-ESI-MS/MS快速检测肉类中瘦肉精的方法，其特征在于：
建立前处理：称取肉类样品，加入盐酸溶液震荡，然后加入醋酸乙腈溶液震荡，再离心，萃取液于FaVEx快速过滤柱中过滤，移取过滤液氮吹至近干，定容后，形成样品溶液；所述样品与盐酸溶液的用量比为2g：1mL，样品与醋酸乙腈溶液的量比为2g：10mL；所述定容采用0.1甲酸水-甲醇(95:5)；
设置TD-ESI-MS条件：包括注射泵溶剂、注射泵流速、热解吸温度、雾化器压力、毛细管电压、干燥气温度和干燥气流速；所述注射泵溶剂为0.1％甲酸水溶液-甲醇(1:1，V:V)，注射泵流速为100～200μL/h，所述雾化器压力为1psi或3psi或5psi；
定性分析：将混合对照品溶液移取至探针表面取样环，探针插入加热管，高温解吸探针表面物质，待测物离子化，进入质谱仪检测分析；若样品溶液与对照品溶液具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，且待测物的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比相一致，样品中存在对照品中的化合物，即样品中含有瘦肉精；所述解吸温度为260-300℃。


2.根据权利要求1所述的FaPEx-TD-ES...

【专利技术属性】
技术研发人员：张虹艳，邱国玉，常巧英，王小乔，
申请(专利权)人：兰州市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62