一种可见光下裸眼可视的植物遗传转化的无损筛选系统、构建方法及其应用技术方案

本发明专利技术涉及一种植物遗传转化的无损筛选方法及其应用。植物遗传转化依赖高效的筛选系统，常用的筛选系统包括抗生素筛选、报告系统筛选。现有的报告系统筛选需要特殊的设备、昂贵的化学药品或对生物样品进行破坏性处理。本发明专利技术构建了一个新的报告基因RUBY，该基因合成的酶能将酪氨酸转化为红色的甜菜红素，本发明专利技术利用RUBY指示植物遗传转化的发生，成功实现可见光下裸眼可视的植物遗传转化的无损筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种可见光下裸眼可视的植物遗传转化的无损筛选系统、构建方法及其应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种新的植物遗传转化报告系统及其应用。本专利技术的报告系统通过植物体内产生的可见光下可被裸眼直接观察的色素来指示。本专利技术还涉及上述报告系统的构建和应用。
技术介绍
植物的遗传转化的筛选主要依赖抗生素或者除草剂进行筛选，通过在遗传转化的载体上添加一个抗生素或者除草剂抗性基因表达盒，发生遗传转化的植株则会表现出对特定抗生素或者除草剂的抗性。但是抗生素或者除草剂筛选方法存在一些弊端。首先，不同种类植物对不同的抗生素的敏感性差异很大。少数植物，比如拟南芥、水稻、玉米、小麦、油菜等植物对潮霉素或新霉素或草甘膦较为敏感，可以用于筛选转基因植株，但是较多园艺植物或者林木对抗生素或者常用除草剂较不敏感，无法有效进行筛选。其次，一些植物在遗传转化过程中较容易发生非抗性组织逃逸现象，导致产生的遗传转化植株嵌合率高，无法有效筛选出纯合的转基因植株。第三，抗生素或者除草剂筛选策略无法较好的进行in-planta转化(直接对完整植株的某一部分组织进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可见光下裸眼可视的植物遗传转化的无损筛选系统，其特征在于，所述筛选系统为包括RUBY基因表达盒的报告基因载体，所述RUBY基因表达盒包括顺次设置的启动子、甜菜红素生物合成基因RUBY基因、终止子。/n

【技术特征摘要】
1.一种可见光下裸眼可视的植物遗传转化的无损筛选系统，其特征在于，所述筛选系统为包括RUBY基因表达盒的报告基因载体，所述RUBY基因表达盒包括顺次设置的启动子、甜菜红素生物合成基因RUBY基因、终止子。


2.根据权利要求1所述的无损筛选系统，其特征在于，所述RUBY基因包括CYP76AD1基因、DODA基因和GT基因；
所述CYP76AD1基因的核苷酸序列包含编码SEQIDNO.1所示CYP76AD1氨基酸序列的核苷酸序列，
所述DODA基因的核苷酸序列包含编码SEQIDNO.2所示DODA氨基酸序列的核苷酸序列，
所述GT基因的核苷酸序列包含编码SEQIDNO.3所示GT氨基酸序列的核苷酸序列；
优选的，所述CYP76AD1基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，所述DODA基因的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，所述GT基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。


3.根据权利要求2所述的无损筛选系统，其特征在于，所述CYP76AD1基因、DODA基因和GT基因之间通过DNA连接单元以任意顺序连接。


4.根据权利要求3所述的无损筛选系统，其特征在于，所述DNA连接单元为能够转录和翻译成一种带有自切割功能多肽的DNA序列；
优选的，所述DNA连接单元的核苷酸序列包含编码SEQIDNO.4所示2A肽氨基酸序列的DNA序列；
进一步优选的，所述DNA连接单元为核苷酸序列如SEQIDNO.8所示的2A1，或核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的2A2。


5.根据权利要求1所述的无损筛选系统，其特征在于，报告基因载体的骨架质粒为植物载体。


6.根据权利要求1所述的无损筛选系统，其特征在于，所述报告基因载体还包括待转化的目的基因。


7.根据权利要求1所述的无损筛选系统，其特征在于，所述启动子为能在植物中发挥功能的启动子，所述终止子为能在植物中发挥功能的终止子；
优选的，所述启动子为能在双子叶类植物或单子叶类植物中发挥功能的启动子，所述终止子为能在双子叶类植物或单子叶类植物中发挥功能的终止子；
进一步优选的，所述启动子为能在拟南芥或水稻中发挥功能的启动子，所述终止子为能在拟南芥或水稻中发挥功能的终止子；
更进一步优选的，所述启动子为35S启动子或OsActin1的启动子，所述终止子为tHsp。


8.一种可见光下裸眼可视...

【专利技术属性】
技术研发人员：和玉兵，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32