鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白及其制备方法和应用。培养大肠杆菌菌株并提取其DNA，设计大肠杆菌外膜蛋白表面抗原区域(21～274aa)基因序列的引物对，以鸭疫里默氏杆菌基因组DNA为模板进行PCR扩增。PCR产物和载体pET‑28a(+)连接并转化E.coli BL21感受态细胞中，采取IPTG诱导的方法，诱导大肠杆菌外膜蛋白rBamD表达。经过纯化最终得到重组的大肠杆菌外膜蛋白rBamD。该重组外膜蛋白具有一定的免疫原性及抗原性，能够有效抵抗鸭疫里默氏杆菌病的感染，以及鸭疫里默氏杆菌所引起的疾病。

【技术实现步骤摘要】
鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白及其制备方法和应用
本专利技术涉及蛋白质工程和基因工程领域，尤其涉及鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer，RA)，RA系革兰氏阴性短杆菌，无鞭毛及芽孢，不运动，可产生荚膜，可感染家鸭、鹅、火鸡、雉鸡等，是目前危害水禽养殖业的主要病原菌，广泛分布于世界各地的养鸭场，且感染后较难清除。RA感染途径多为呼吸道感染和皮肤伤口(特别是脚部皮肤)感染，引起一种急性或慢性败血性细菌性传染病，典型病理变化是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎等。该病的感染率有时可高达90％以上，但由于各血清型之间的毒力存在较大差异，所以死亡率为5％～75％不等，急性型表现为急性败血症死亡，慢性型一般无明显症状，有些可表现为减重、产蛋量下降等。该病病死率最高可达90％，对水禽养殖业，尤其鸭和鹅的养殖造成重大损失。随着抗生素的长期大量使用，大大加速了致病菌耐抗药性的进化。越来越多的耐药性菌株不断出现。研究表明，鸭疫里默氏杆菌基因组中抗药性基因的比重现在已大量增加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白，其特征在于，编码所述鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：
1)以鸭疫里默氏杆菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增，PCR扩增引物为：
BamDF-BamHⅠ：5′-GGATCCTACGACCTAGCAATGAAA-3′，
BamDR-NotⅠ：5′-GCGGCCGCCTGTTCTACTAACTTTTCT-3′；
2)将步骤1)获得的PCR产物与克隆载体连接，转化，提取质粒并测序；
3)将步骤2)测序正确的质粒与表达载体酶切连接，得重组原核表达质粒；
4)将步骤3)提取的重组质粒转化到表达宿主菌诱导表达，得鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白。


4.根据权利要求3所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，其特征在于，步骤2)中，与克隆载体pMD-19Tsimple...

【专利技术属性】
技术研发人员：管庆丰，杨慧，韩谦，张海文，廖承红，赵建国，王金花，刘又铭，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;46