一种代谢物蛋白互作检测方法技术

本发明专利技术属于代谢物蛋白互作检测技术领域，更具体地，本发明专利技术涉及一种代谢物蛋白互作检测方法。本发明专利技术提供一种代谢物蛋白互作检测方法，包括以下步骤：(1)总蛋白的提取：从样品中取10～40ug总蛋白，进行SDS‑PAGE电泳；(2)代谢物与蛋白的孵育：固定代谢小分子与总蛋白共同孵育为实验组；以总蛋白孵育为对照组，将两组分别进行孵育；(3)蛋白的酶解：将孵育后的实验组和对照组样本进行还原、烷基化以及胰酶酶解处理；(4)肽段收集和检测：利用C18 column分别收集实验组和对照组的肽段，利用液相色谱‑质谱联用仪对肽段进行检测分析。

【技术实现步骤摘要】
一种代谢物蛋白互作检测方法
本专利技术涉及代谢物蛋白互作检测
，更具体地，本专利技术涉及一种代谢物蛋白互作检测方法。
技术介绍
内源性代谢物小分子是胞内分子化合物的主要成分，并且各种代谢物分子在胞内浓度分布上具有较大差异。其所涉及的与多种多样的蛋白质的相互作用(无论是通过以产物/底物的形式参与酶促反应过程，或是以变构辅因子/配体的形式变构调控蛋白质)，已被证明可以控制生化反应中的物质能量代谢并且能通过信号传导来调节整个生理过程。因此，解析阐述生理条件下的代谢物-蛋白质相互作用能够揭示隐藏在疾病/健康状态下的分子理论基础，对于人类健康与医药发展至关重要。此外，疾病相关蛋白质的代谢调节剂还可能为潜在的治疗干预措施提供新的策略。尽管研究者们已经发现了数量可观的代谢物-蛋白质相互作用，但基于代谢体系的复杂性以及缺乏有效的表征手段，只有其中的一小部分所涉及的相互作用网络被研究透彻。常见的用以表征代谢物-蛋白质相互作用的研究手段包括荧光光谱法、表面等离子体共振、等温滴定量热法、核磁共振法等，但大多数这样的研究手段均需要在分析之前对蛋白质/配体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢物蛋白互作检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)总蛋白的提取：从样品中取10～40ug总蛋白，进行SDS-PAGE电泳；/n(2)代谢物与蛋白的孵育：固定代谢小分子与总蛋白共同孵育为实验组；以总蛋白孵育为对照组，将两组分别进行孵育；/n(3)蛋白的酶解：将孵育后的实验组和对照组样本进行还原、烷基化以及胰酶酶解处理；/n(4)肽段收集和检测：利用C18 column分别收集实验组和对照组的肽段，利用液相色谱-质谱联用仪对肽段进行检测分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种代谢物蛋白互作检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)总蛋白的提取：从样品中取10～40ug总蛋白，进行SDS-PAGE电泳；
(2)代谢物与蛋白的孵育：固定代谢小分子与总蛋白共同孵育为实验组；以总蛋白孵育为对照组，将两组分别进行孵育；
(3)蛋白的酶解：将孵育后的实验组和对照组样本进行还原、烷基化以及胰酶酶解处理；
(4)肽段收集和检测：利用C18column分别收集实验组和对照组的肽段，利用液相色谱-质谱联用仪对肽段进行检测分析。


2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述液相色谱柱为C18类型的纳升级肽段分析柱。


3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述样品母液和溶剂的体积比为1：(80-120)。


4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述液相色谱洗脱剂由A液和B液组成，所述A液或B液选自水、乙腈、二甲基亚砜、二氯甲烷中的任一种以及0.1～0.3％v/v的缓冲液的混合。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：何敬全，黄强，范艳群，高广东，
申请(专利权)人：上海百趣生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31