草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR检测引物组、试剂盒及其应用。本发明专利技术设计得到草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT‑PCR引物组，并基于该引物组，通过特定法扩增体系和条件检测草鱼呼肠孤病毒II型。其PCR反应第一次扩增可以检测到10

【技术实现步骤摘要】
草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用
本专利技术属于基因检测领域，具体涉及草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR检测引物、试剂盒及其应用。
技术介绍
草鱼养殖是淡水养殖业重要组成部分，草鱼产量在2015年水产养殖总产量占比20％。草鱼呼肠孤病毒(Grasscarpreovirus，GCRV)会引起草鱼出血病，其严重影响了草鱼养殖业的健康发展，造成草鱼养殖户巨大的经济损失。草鱼呼肠孤病毒具有危害种类多、流行范围广、发病季节长和死亡率高等特点，草鱼出血病主要危害1～2龄草鱼，感染后死亡率最高可达60％～100％。除草鱼外，还能感染青鱼、鲢鱼、鲫鱼和麦穗鱼等多种鱼类，并且稀有鮈鲫感染后死亡率达到100％。草鱼呼肠孤病毒具有双层衣壳和11个节段(S1～S11)双链RNA的基因组，无囊膜，二十四面体对称结构，病毒粒子直径大小为60～70nm。现已报道出有30多个呼肠孤病毒分离株，所有毒株总体上可分为3个基因型，即GCRVI型、II型和III型，代表株分别为873株、HZ08株和104株。根据研究人员开展的流本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR引物组，其特征在于，所述RT-PCR引物组的核苷酸序列为：/nGCRV-II Nest-SP：5'-CGCGATTTCATACCCTTTCT-3'；/nGCRV-II Nest-OutP：5'-TAGCTGCCGTACTTGGGATGA-3'；/nGCRV-II Nest-InP：5'-CATACGATCGCTCCCAACTCC-3'。/n

【技术特征摘要】
1.草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR引物组，其特征在于，所述RT-PCR引物组的核苷酸序列为：
GCRV-IINest-SP：5'-CGCGATTTCATACCCTTTCT-3'；
GCRV-IINest-OutP：5'-TAGCTGCCGTACTTGGGATGA-3'；
GCRV-IINest-InP：5'-CATACGATCGCTCCCAACTCC-3'。


2.一种用于检测草鱼呼肠孤病毒II型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的RT-PCR引物组、cDNA模板和RT-PCR反应试剂。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品；所述阳性对照品为草鱼呼肠孤病毒II型HZ08株cDNA。


4.一种草鱼呼肠孤病毒II型的巢式RT-PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样品中的RNA，逆转录合成cDNA模板；
(2)使用GCRV-IINest-SP和GCRV-IINest-OutP对步骤(1)所得cDNA模板进行RT-PCR扩增，得到扩增产物A；
(3)使用GCRV-IINest-SP和GCRV-IINest-InP对步骤(2)所得扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：王英英，王庆，曾伟伟，李莹莹，尹纪元，吴斯宇，石存斌，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44