用于产生针对肽-MHC复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途技术

利用编码人或人源化MHC分子或缔合的分子，例如β2微球蛋白的序列对非人动物进行基因修饰，并且所述非人动物对所述序列的表达诱导对从中获得所述人或人MHC分子的相应人HLA的耐受性。当此类HLA呈递对非人动物来说具有抗原性的肽时，这些非人动物所展示的耐受性允许这些动物对相应人HLA产生特异性抗体应答。特异性靶向所关注的pMHC复合物并且不结合于MHC分子的此类抗体应答可用于靶向免疫突触的组分的免疫治疗模态中，这提供了相互作用的特异性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生针对肽-MHC复合物的治疗性抗体的经过基因修饰的非人动物、其制造方法和用途
本文公开了进行基因修饰的非人动物(例如啮齿动物(例如大鼠、小鼠等))，其耐受人(源化)MHC分子(例如但不限于空人(源化)MHC分子)，或者其肽结合部分(例如MHC分子的肽结合槽)，以使得当人(源化)MHC分子呈递对非人动物来说是外来物的肽或者与肽复合时，例如当人(源化)MHC分子为肽/MHC(pMHC)复合物的一部分时非人动物可对人(源化)MHC分子产生稳固的B细胞应答，其中所述肽对非人动物来说是异源的。此类动物可用于产生针对病原性pMHC复合物的治疗性抗原结合蛋白，例如在人HLA的背景下呈递的自身免疫原性人自身肽。相关申请本申请要求以下美国临时专利申请号的优先权权益：2018年3月24日提交的第62/647,720号及2018年3月24日提交的第62/647,724号，每个申请以全文引用的方式并入本文中。序列表本说明书参考一序列表，所述序列表是作为名为“10116WO01_ST25_AsFiled”的ascii.txt文件以电子形式提交的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经过基因修饰的非人动物，其基因组包含/n(a)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和/n(b)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中所述(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，/n其中所述经过基因修饰的非人动物表达所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，/n其中所述经过基因修饰的非人动物表达包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的免疫球蛋白，并且/n其中所述非人动物耐受所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180324 US 62/647,720;20180324 US 62/647,7241.一种经过基因修饰的非人动物，其基因组包含
(a)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列；和
(b)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中所述(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，
其中所述经过基因修饰的非人动物表达所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，
其中所述经过基因修饰的非人动物表达包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的免疫球蛋白，并且
其中所述非人动物耐受所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，使得当用包含(i)对所述非人动物来说为异源的肽与(ii)从中获得所述人或人源化MHC分子的人HLA分子或其一部分复合的抗原肽-MHC(pMHC)复合物进行免疫接种时，所述非人动物产生特异性B细胞应答。


2.如权利要求1所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述人或人源化MHC分子选自由以下组成的群组：人或人源化MHCI类分子、人或人源化MHCII类α分子、人或人源化MHCII类β分子或其任何组合，和/或
其中所述经过基因修饰的非人动物包含
(a)在内源重链基因座处：
(i)与内源重链恒定区呈可操作连接的未重排的人或人源化免疫球蛋白重链可变区；
(ii)与内源重链恒定区呈可操作连接的受限的未重排的人或人源化重链可变区；
(iii)共同重链编码序列；
(iv)与内源重链恒定区呈可操作连接的经过组氨酸修饰的未重排的人或人源化重链可变区；
(v)只有重链的免疫球蛋白编码序列；或
(vi)编码杂交免疫球蛋白链的未重排的人或人源化杂交重链序列；
和/或
(b)在内源轻链基因座处：
(i)与内源轻链恒定区呈可操作连接的未重排的人或人源化免疫球蛋白轻链可变区；
(ii)共同轻链编码序列；
(iii)与内源轻链恒定区呈可操作连接的受限的未重排的人或人源化轻链可变区；
(iv)与内源轻链恒定区呈可操作连接的经过组氨酸修饰的未重排的人或人源化轻链可变区；或
(v)与内源轻链恒定区呈可操作连接的经过组氨酸修饰的重排的人或人源化轻链可变区。


3.如权利要求1或权利要求2所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述非人动物进一步包含功能性ADAM6基因，任选地其中所述功能性ADAM6基因为内源ADAM6基因。


4.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述非人动物进一步表达外源末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)基因。


5.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述人或人源化MHC分子为人或人源化MHCI类分子，任选地其中所述人或人源化MHC分子来源于选自由HLA-A分子、HLA-B分子、HLA-C分子和其任何组合组成的群组的HLAI类分子。


6.如权利要求5所述的经过基因修饰的非人动物，其在其基因组中，任选地在内源β2微球蛋白基因座处，进一步包含编码人或人源化β2微球蛋白的核苷酸序列，
其中所述非人动物表达所述人或人源化β2微球蛋白，使得所述非人动物耐受所述β2微球蛋白本身或与所述人或人源化I类分子缔合的β2微球蛋白。


7.如权利要求1至4中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述人或人源化MHC分子为人或人源化MHCII类分子，任选地其中所述人或人源化MHC分子来源于选自由HLA-DP、HLA-DQ、HLA-DR分子和其任何组合组成的群组的HLAII类分子的α和/或β链，或至少肽结合槽。


8.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述核苷酸序列编码完全人HLA分子，
任选地其中所述核苷酸序列不破坏内源非人MHC基因座，任选地其中所述核苷酸序列放至内源ROSA26基因座中。


9.如权利要求1至7中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述核苷酸序列编码嵌合人/非人MHC分子，所述嵌合人/非人MHC分子包含可操作地连接于内源MHC分子的跨膜和胞浆结构域的人HLA分子的胞外结构域，任选地其中所述核苷酸序列编码
(i)嵌合人/非人MHCI类分子，所述嵌合人/非人MHCI类分子包含可操作地连接于内源非人MHCi类分子，例如内源鼠类H-2K多肽、内源鼠类H-2D多肽或内源鼠类H-DL多肽的跨膜和胞浆结构域的选自由HLA-A、HLAB和HLA-C组成的群组的人MHCI类分子的α1、α2和α3结构域；和/或
(ii)嵌合人/非人MHCII类分子，所述嵌合人/非人MHCII类分子包含可操作地连接于内源非人MHCII类α分子，例如内源鼠类H-2Aα多肽或内源鼠类H-2Eα多肽的跨膜和胞浆结构域的人HLAII类α多肽的α1和α2结构域，和/或可操作地连接于内源非人MHCII类β分子，例如内源鼠类H-2Aα多肽或内源鼠类H-2Eα多肽的跨膜和胞浆结构域的人HLAI类β多肽的β1和β2结构域。


10.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其进一步包含抗原肽-MHC(pMHC)复合物，所述复合物包含对所述非人动物来说为异源的肽与从中获得所述人或人源化MHC分子的人HLA分子缔合。


11.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其进一步包含
(c)抗原肽-MHC(pMHC)复合物，所述复合物包含(i)对所述非人动物来说为异源的肽与(ii)从中获得所述人或人源化MHC分子的人HLA分子或其一部分缔合，和
(d)特异性结合所述抗原肽-MHC并且不结合从中获得所述人或人源化MHC分子的所述人HLA分子的人或人源化抗原结合蛋白。


12.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述非人动物针对所述编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列是杂合的。


13.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述非人动物是啮齿动物，例如大鼠或小鼠。


14.如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物，其中所述非人动物是小鼠。


15.一种制造如前述权利要求中任一项所述的经过基因修饰的非人动物的方法，所述方法包含对其基因组进行修饰以包含
(a)编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列，和
(b)(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座，任选地其中所述(未)重排的人或人源化免疫球蛋白重链基因座和/或(未)重排的人或人源化免疫球蛋白轻链基因座中的至少一个未重排，
其中所述经过基因修饰的非人动物
A.耐受所述人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分，使得当用包含(i)对所述非人动物来说为异源的肽与(ii)从中获得所述人或人源化MHC分子的人HLA分子或其一部分复合的肽-MHC复合物进行免疫接种时，所述非人动物产生特异性B细胞应答，并
B.能够提供包含人或人源化重链可变结构域和/或人或人源化轻链可变结构域的人或人源化抗原结合蛋白。


16.如权利要求15所述的方法，其中所述方法包含：
(a)
(i)将编码人或人源化MHC分子或至少其肽结合部分的核苷酸序列插入至第一异位基因座中，或
(ii)在内源非人动物MHCI基因座处用...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US