一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法技术

本发明专利技术涉及环境、食品安全分析领域，提供一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法，本发明专利技术利用核酸适配体对甲胺磷的特异性识别和高度结合能力、以核酸适配体修饰的纳米金粒子作为检测指示剂，通过观察检测线显色实现对甲胺磷的快速检测，解决了叶菜中甲胺磷残留超标仍时有发生，但最终执法很难快速的鉴定叶菜是否存在违规使用甲胺磷，对农产品质量安全监管和执法带来极大困难的问题。本发明专利技术尤其适用于甲胺磷检测，结构简单，操作方便，检测耗时短，检测结果直观，不依赖仪器设备，无需配制试剂，携带方便，且检测人员不需专业培训，适合现场检测应用，具有较高的社会使用价值和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法
本专利技术涉及环境、食品安全分析领域，具体涉及一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法。
技术介绍
核酸适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列，能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合，它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台，并在许多方面展示了良好的应用前景。甲胺磷(MAP)，又称多灭磷，是一种内吸性很强、兼有触杀和胃毒作用的高效有机磷杀虫剂，杀虫范围广。国家发改委、农业部、国家工商总局、国家检验检疫总局、国家环保总局、国家安全监督总局2008年1月9日联合发布2008年第一号公告说：为保障农产品质量安全，中国决定停止甲胺磷等五种高毒农药的生产、流通、使用。公告最后要求，各级发展改革(经贸)、农业、工商、质量监督检验、环保、安全监管等行政管理部门，要按照《农药管理条例》等有关法律法规的规定，加强对农药生产、流通、使用的监督管理。在近几年叶菜的农药残留检测监管中发现，叶菜中甲胺磷残留超标仍时有发生，但最终执法很难快速的鉴定叶菜是否存在违规使用甲胺磷，对农产品质量安全监管和执法带来极大困难。为此，我们提出了一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法，克服了现有技术的不足，设计合理，结构紧凑，旨在解决叶菜中甲胺磷残留超标仍时有发生，但最终执法很难快速的鉴定叶菜是否存在违规使用甲胺磷，对农产品质量安全监管和执法带来极大困难的问题。(二)技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，包括粘和背板，所述粘和背板上水平向依次粘贴有样品接触垫、纳米金垫、硝酸纤维素膜和吸水动力垫；所述样品接触垫一侧叠盖纳米金垫，纳米金垫叠盖硝酸纤维素膜，且硝酸纤维素膜另一端为吸水动力垫所叠盖，各部分叠盖的宽度1.9-2.1mm；所述纳米金垫含有甲胺磷核酸适配体修饰的纳米金粒子和质控DNA修饰的纳米金粒子；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，检测线含有能够捕获甲胺磷核酸适配体的适配体DNA探针，质控线含有能够捕获质控DNA的质控DNA探针。优选的，所述适配体DNA探针与甲胺磷通过竞争结合甲胺磷核酸适配体修饰的纳米金粒子，实现检测目的；a)检测液中不存在甲胺磷时，检测线显色、质控线显色；b)检测液中存在甲胺磷时，检测线不显色或色度降低、质控线显色。本专利技术还提供一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸的制备方法，包括以下步骤：S1、样品接触垫的制备：聚酯纤维膜浸入TBS缓冲液30min，随后置于37℃恒温干燥箱中烘干，干燥条件保存、备用；S2、纳米金垫的制备：分别将巯基标记的甲胺磷核酸适配体和巯基标记的质控DNA通过Au-S键组装于纳米金表面，二者等比例混合，加入玻璃纤维膜，37℃环境下干燥，密封，制得纳米金垫；S3、硝酸纤维素膜的制备：在所述硝酸纤维素膜接近纳米金垫处用链亲和素偶联生物素标记的适配体DNA探针划出检测线；在接近吸水动力垫处用链亲和素偶联生物素标记的质控DNA探针划出质控线；S4、试纸的组装：在粘和背板上依次叠盖粘贴样品接触垫、纳米金垫、硝酸纤维素膜和吸水动力垫，得到检测试纸。优选的，所述步骤S4中，样品接触垫和吸水动力垫分别粘贴在粘和背板两侧，且样品接触垫一侧叠盖纳米金垫，纳米金垫叠盖硝酸纤维素膜，且硝酸纤维素膜另一端为吸水动力垫所叠盖。优选的，所述步骤S2中，巯基标记的甲胺磷核酸适配体序列为：5′-SH-(CH2)6-GGGTCAATACCTGCAATTACCACATTTAAAGGCAA-3′。优选的，所述步骤S2中，巯基标记的质控DNA序列为：5′-SH-(CH2)6-TTTTTTTTTTTTTTT-3′。优选的，所述步骤S3中，生物素标记的适配体DNA探针序列为：5′-GTAATTGCAGGTATT-biotin-3′。优选的，所述步骤S3中，生物素标记的质控DNA探针序列为：5′-AAAAAAAAAAAAAAA-biotin-3′。(三)有益效果本专利技术实施例提供了一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法，具备以下有益效果：1、本专利技术提出的基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，实现了对农产品中甲胺磷残余的快速检测，为最终执法提供理论依据和数据支撑，保障农产品质量安全。2、本专利技术提出的基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，在甲胺磷浓度处于一定范围内时，其检测线光密度变化呈现一定的线性变化，辨识性强，使得本检测试纸有较好的实际适用性。3、本专利技术提出的基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，对甲胺磷的检测有较高的特异性，且试纸可以准确呈现甲胺磷存在的肉眼可见响应，具有较好的应用性。4、本专利技术提出的基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，稳定性较好，可长时间保存和使用。附图说明下面将以明确易懂的方式，结合附图说明优选实施方式，对一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法的上述特性、技术特征、优点及其实现方式予以进一步说明。图1为本专利技术的甲胺磷快速检测试纸结构示意图；图2为本专利技术的甲胺磷快速检测试纸检测结果a图；图3为本专利技术的甲胺磷快速检测试纸检测结果b图；图4为本专利技术的试纸检测不同浓度甲胺磷标准溶液的效果图；图5为本专利技术的试纸检测线光密度分析图；图6为本专利技术的试纸检测特异性的检验图；图7为本专利技术的试纸检测实际样品的效果图；图8为本专利技术的试纸检测稳定性的检验图。图中：1、粘和背板；2、样品接触垫；3、纳米金垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水动力垫；6、检测线；7、质控线；8、生物素；9、链亲和素；A、甲胺磷核酸适配体；B、质控DNA；C、适配体DNA探针；D、质控DNA探针。具体实施方式下面结合附图1-8和实施例对本专利技术进一步说明：实施例1如图1所示，一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，包括粘和背板1，所述粘和背板1上水平向依次粘贴有样品接触垫2、纳米金垫3、硝酸纤维素膜4和吸水动力垫5；所述样品接触垫2一侧叠盖纳米金垫3，纳米金垫3叠盖硝酸纤维素膜4，且硝酸纤维素膜4另一端为吸水动力垫5所叠盖，各部分叠盖的宽度1.9-2.1mm；所述纳米金垫3含有甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子和质控DNA(B)修饰的纳米金粒子；所述硝酸纤维素膜4上设有检测线6和质控线7，检测线6含有能够捕获甲胺磷核酸适配体(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，包括粘和背板(1)，其特征在于，所述粘和背板(1)上水平向依次粘贴有样品接触垫(2)、纳米金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水动力垫(5)；/n所述样品接触垫(2)一侧叠盖纳米金垫(3)，纳米金垫(3)叠盖硝酸纤维素膜(4)，且硝酸纤维素膜(4)另一端为吸水动力垫(5)所叠盖，各部分叠盖的宽度1.9-2.1mm；/n所述纳米金垫(3)含有甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子和质控DNA(B)修饰的纳米金粒子；/n所述硝酸纤维素膜(4)上设有检测线(6)和质控线(7)，检测线(6)含有能够捕获甲胺磷核酸适配体(A)的适配体DNA探针(C)，质控线(7)含有能够捕获质控DNA(B)的质控DNA探针(D)。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，包括粘和背板(1)，其特征在于，所述粘和背板(1)上水平向依次粘贴有样品接触垫(2)、纳米金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水动力垫(5)；
所述样品接触垫(2)一侧叠盖纳米金垫(3)，纳米金垫(3)叠盖硝酸纤维素膜(4)，且硝酸纤维素膜(4)另一端为吸水动力垫(5)所叠盖，各部分叠盖的宽度1.9-2.1mm；
所述纳米金垫(3)含有甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子和质控DNA(B)修饰的纳米金粒子；
所述硝酸纤维素膜(4)上设有检测线(6)和质控线(7)，检测线(6)含有能够捕获甲胺磷核酸适配体(A)的适配体DNA探针(C)，质控线(7)含有能够捕获质控DNA(B)的质控DNA探针(D)。


2.如权利要求1所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述适配体DNA探针(C)与甲胺磷通过竞争结合甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子，实现检测目的；
a)检测液中不存在甲胺磷时，检测线(6)显色、质控线(7)显色；
b)检测液中存在甲胺磷时，检测线(6)不显色或色度降低、质控线(7)显色。


3.基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、样品接触垫(2)的制备：聚酯纤维膜浸入TBS缓冲液30min，随后置于37℃恒温干燥箱中烘干，干燥条件保存、备用；
S2、纳米金垫(3)的制备：分别将巯基标记的甲胺磷核酸适配体(A)和巯基标记的质控DNA(B)通过Au-S键组装于纳米金表面，二者等比例混合，加入玻璃纤维膜，37℃环境下干燥，密封，制得纳米金垫(3)；
S3、硝酸纤维素膜(4)的制备：在所述硝酸纤维素膜(4)接近纳米金垫处用链亲和素(9)偶联生物素...

【专利技术属性】
技术研发人员：张强，王丽，唐伟绩，迟恩忠，赵新淮，韦明肯，欧阳乐军，童汉清，海金萍，赵俊仁，
申请(专利权)人：广东石油化工学院，
类型：发明
国别省市：广东;44