【技术实现步骤摘要】
一种污染物对绿藻细胞内活性氧含量影响的测定方法
本专利技术属于环境毒理学领域，特别涉及一种污染物对绿藻细胞内活性氧含量影响的测定方法。该方法利用流式细胞仪检测农药污染物唑类杀菌剂（克霉唑）对蛋白核小球藻（Chlorellapyrenoidosa）细胞内活性氧含量的影响。
技术介绍
绿藻是水生生态系统的初级生产者，对水体的平衡和稳定起着极其重要的作用，是反映水体环境质量的重要指标。活性氧（ROS）对生物体十分重要，但过量会对生物体产生氧化损伤导致细胞死亡。由于ROS寿命短、反应活性高，且大部分都存在于体内很难被捕获，因此活体中ROS的直接检测对于解释生命机体的各种生理反应有着重要的意义。DCFH-DA是迄今最常用、最灵敏的细胞内ROS检测探针，进入细胞后被酯酶水解为DCFH，在ROS存在时DCFH被氧化为不能透过细胞膜的强绿色荧光物质DCF。流式细胞术采用细胞作为实验对象，悬液中的单细胞或其他生物粒子通过检测标记的DCF荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选。传统的方法是将细胞进行孵育后，使用酶标仪、色谱分析等技...
【技术保护点】
1.一种污染物对绿藻细胞内活性氧含量影响的测定方法，其特征在于具体步骤为：/n（1）试验液配置：称取目标污染物原药，溶于BG-II培养液中配置母液，并将母液稀释至所需浓度，配制成梯度浓度的试验液；/n（2）绿藻培养：选择纯培养条件下处于对数生长期的蛋白核小球藻，并用血球计数法计算藻细胞浓度，用BG-II培养液稀释至所需的初始藻细胞浓度，获得处于对数生长期的蛋白核小球藻均匀藻液；/n（3）毒性暴露及藻细胞收集：采用摇瓶法，在无菌条件下，将步骤（2）获得的处于对数生长期的蛋白核小球藻均匀藻液，分装于250 mL的锥形瓶中，每个锥形瓶20 mL藻液；再次向各锥形瓶中依次添加步骤（...
【技术特征摘要】
1.一种污染物对绿藻细胞内活性氧含量影响的测定方法，其特征在于具体步骤为：
（1）试验液配置：称取目标污染物原药，溶于BG-II培养液中配置母液，并将母液稀释至所需浓度，配制成梯度浓度的试验液；
（2）绿藻培养：选择纯培养条件下处于对数生长期的蛋白核小球藻，并用血球计数法计算藻细胞浓度，用BG-II培养液稀释至所需的初始藻细胞浓度，获得处于对数生长期的蛋白核小球藻均匀藻液；
（3）毒性暴露及藻细胞收集：采用摇瓶法，在无菌条件下，将步骤（2）获得的处于对数生长期的蛋白核小球藻均匀藻液，分装于250mL的锥形瓶中，每个锥形瓶20mL藻液；再次向各锥形瓶中依次添加步骤（1）配制的梯度浓度的试验液至总体积为100mL，并将BG-II培养液作为空白对照，使各个浓度组的每个目标污染物的浓度分别为0、0.008、0.08、0.8和8mg/L；加入目标污染物后，将蛋白核小球藻置于原培养条件下暴露处理，每天定时摇动3~4次，连续培养至96h后，取5mL均匀藻液，冷冻离心后收集...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，覃礼堂，莫凌云，梁延鹏，曾鸿鹄，宋晓红，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：广西;45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。