【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的安全型复制子系统及其应用
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的安全型复制子系统及其应用。
技术介绍
截止2020年7月23日，新型冠状病毒SARS-CoV-2已经造成全球1500多万人感染，14多万人死亡。但是，目前应用于SARS-CoV-2感染的临床治疗药物非常有限。因为生物安全的原因，针对野生型SARS-CoV-2的药物开发和筛选只能局限在生物安全三级实验室(P3实验室)中进行，这大大限制了针对SARS-CoV-2的抗病毒药物开发。之前的研究也显示，将E蛋白缺失的冠状病毒基因组插入到人工染色体(BacterialArtificialChromosome，BAC)上，所构建的安全复制子系统可以模拟冠状病毒的复制。该系统也已经应用在SARS-CoV的药物验证和药物筛选。但是该系统基于BAC质粒。BAC质粒分子量较大，且不稳定，在转导细胞后达不到理想的表达水平，同时，操作起来费时费力。因此急需开发一种能够模拟SARS-CoV-2病...
【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制子结构，包含以下内容的核酸序列：/n(Ⅰ)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白；/n(Ⅱ)新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、3’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域和报告基因。/n
【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制子结构，包含以下内容的核酸序列：
(Ⅰ)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白；
(Ⅱ)新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、3’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域和报告基因。
2.根据权利要求1所述的复制子结构，其特征在于，所述非结构蛋白选自新型冠状病毒SARS-CoV-2的nsp1～16蛋白中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的复制子结构，其特征在于，所述转录调控区域选自新型冠状病毒SARS-CoV-2的S、ORF3a、M、ORF7a、ORF8或N基因的转录调控区域中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的复制子结构，其特征在于，所述转录调控区域位于报告基因的上游。
5.根据权利要求1所述的复制子结构，其特征在于，还包含作为参照的另一报告基因的核酸序列。
6.根据权利要求5所述的复制子结构，其特征在于，所述作为参照的另一报告基因连接有终止密码子且位于转录调控区域的上游。
7.根据权利要求1至6任一所述的复制子结构，其特征在于，所述核酸为DNA或RNA，优选为反义RNA。
8.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制子系统，包含插入有权利要求1至7任一所述的复制子结构的表达载体。
9.根据权利要求8所述的复制子系统，其特征在于，包括含有以下内容的两种表达载体：
(ⅰ)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白的核酸序列；
(ⅱ)新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、3’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域和报告基因的核酸序列。
10.根据权利要求9所述的复制子系统，其特征在于，表达载体(ⅱ)中依次插入有新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域、报告基因、新型冠状病毒SARS-CoV-2的3’UTR的核酸序列。
11.根据权利要求9所述的复制子系统，其特征在于，表达载体(ⅱ)中依次插入有新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、报告基因A、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域、报告基因B、新型冠状病毒SARS-CoV-2的3’UTR的核酸序列，其中报告基因A与报告基因B不同。
12.根据权利要求9所述的复制子系统，其特征在于，新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR与报告基因A之间还连接有核糖体进入位点的核酸序列。
13.根据权利要求11所述的复制子系统，其特征在于，报告基因A为荧光蛋白的核酸序列；报告基因B为编码荧光素酶的核酸序列。
14.根据权利要求11至13任一所述的复制子系统，其特征在于，所述表达载体(ⅱ)中插入的核酸序列如SEQIDNo.28所示。
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