一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法技术

本发明专利技术属于植物病害技术领域，特别是涉及一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法。本发明专利技术提供了一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法，包括：对马铃薯脱毒苗依次进行生根培养和微型薯的诱导培养，诱导培养中接种疮痂病致病菌的发酵液，在继续诱导培养的过程中观察微型薯的产生情况、植株和微型薯的发病情况，根据微型薯病斑的面积和植株的坏死等级，判断马铃薯疮痂病的抗性。本发明专利技术根据疮痂病致病菌利用致病毒素侵染马铃薯块茎导致病害发生的机理，结合马铃薯脱毒苗组织培养、液体诱导微型薯的技术，鉴定马铃薯疮痂病的抗性。本发明专利技术提供的鉴定方法鉴定周期控制在40d左右，大大的缩短了鉴定周期。

【技术实现步骤摘要】
一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法
本专利技术属于植物病害
，特别是涉及一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法。
技术介绍
马铃薯疮痂病(Potatoscab)是一种由土壤链霉菌(Streptomyces.spp)引起，在世界范围内广泛发生的重要病害。其中疮痂链霉菌Streptomyces.Scabies、引起酸性疮痂的Streptomyces.acidiscabies、引起凸状疮痂病斑的Streptomyces.turgidiscabies是马铃薯疮痂病最常见、研究较为集中的3个菌种。感染疮痂病后的马铃薯块茎表皮会产生褐色斑点，并逐渐扩大，侵染点周围的组织逐渐坏死，块茎表面变粗糙，组织木栓化，严重影响马铃薯的品质。据统计，马铃薯疮痂病在碱性土壤、多年连作、以蛭石为基质的温室微型薯生产和栽培管理粗放的地区发生程度更为严重。部分地区有疮痂病发病率高达90％以上的报道。由于疮痂病为危害马铃薯块茎的土传病害，病害发生过程无法直接观测，需要马铃薯完成全生育期，块茎成熟收获后观测鉴定结果，在块茎未收获期间无法了解病原菌对寄主的侵染情况，整个鉴定方法可控性较低。常用的疮痂病抗性鉴定方法为田间种植马铃薯接种病原菌鉴定法和盆栽接种病原菌孢悬液鉴定法，田间接种鉴定接近自然发病，但是鉴定周期为马铃薯全生育期，根据马铃薯品种成熟时间不同，鉴定周期长达90～120d，同时鉴定过程操作复杂，用工量大，需建立病圃，还有造成田间病原菌污染的缺点。温室盆栽接种鉴定较接近自然发病，病原菌污染范围可控，但是同样也要对马铃薯全生育期进行鉴定，存在周期长，成本较高，田间管理复杂等缺点。鉴于上述鉴定方法的不足，迫切需要一种更为经济有效，快速直观，操控性强的马铃薯疮痂病抗性鉴定新方法，以更好地进行抗疮痂病马铃薯资源评价及进行快速准确的筛选和鉴定。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法。本专利技术提供的鉴定方法具有鉴定周期短、可操作性强、病害发生过程全程可观测、鉴定结果一致性强和低成本的积极效果。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法，包括以下步骤：将马铃薯脱毒苗置于生根培养基中进行生根培养，得到生根脱毒苗；将生根脱毒苗置于微型薯诱导培养基中进行微型薯的诱导培养，得到微型薯，在诱导培养期间接种疮痂病致病菌发酵液，观察微型薯的产生情况、植株和微型薯的发病情况，根据微型薯病斑面积等级和植株坏死等级，判断马铃薯疮痂病的抗性；所述微型薯诱导培养基包括：蔗糖28～32g/L、MS培养基4～5g/L和氯化氯代胆碱9～11mg/L，pH值为5.6～6.0。优选的，根据微型薯病斑面积等级和植株坏死等级，计算疮痂指数，根据疮痂指数判断马铃薯疮痂病的抗性的方法包括：根据微型薯病斑的面积确定微型薯病斑面积等级；根据微型薯病斑的面积确定微型薯病斑面积等级的判断方法包括：观察微型薯表面的病斑面积，当微型薯表面无症状，健康时，微型薯病斑面积等级为0级；当0＜微型薯病斑面积≤5％时，微型薯病斑面积等级为1级；当5＜微型薯病斑面积≤12.5％时，微型薯病斑面积等级为2级；当12.5％＜微型薯病斑面积≤25％时，微型薯病斑面积等级为3级；当25％＜微型薯病斑面积≤50％时，微型薯病斑面积等级为4级；当50％＜微型薯病斑面积时，微型薯病斑面积等级为5级；所述植株坏死等级的判断方法包括：观察植株坏死的部分，当植株健康时，植株坏死等级为1级；当0＜植株坏死≤25％时，植株坏死等级为2级；当25％＜植株坏死≤50％时，植株坏死等级为3级；当50％＜植株坏死时，植株坏死等级为4级；根据疮痂指数公式确定疮痂指数，所述疮痂指数公式为：疮痂指数＝微型薯病斑面积等级×植株坏死等级/20×100；根据所述疮痂指数确定马铃薯疮痂病的抗性；所述植株抗性等级的判断方法包括：当0＜疮痂指数≤5时，植株抗性等级为高抗；当5＜疮痂指数≤10时，植株抗性等级为中抗；10＜疮痂指数≤15时，植株抗性等级为低感；当15＜疮痂指数≤30时，植株抗性等级为中感；当30＜疮痂指数≤60时，植株抗性等级为高感；当疮痂指数＞60时，植株抗性等级为重感。优选的，所述生根培养基包括：蔗糖28～32g/L、MS培养基4～5g/L、萘乙酸0.04～0.06mg/L和琼脂2～3g/L，pH值为5.6～6.0。优选的，所述疮痂病致病菌发酵液的制备方法包括：取浓度为106cfu/mL的马铃薯疮痂病强致病菌株Streptomyces.Scabies的菌悬液100μl，在100ml的胰酪大豆胨液体培养基中进行培养，以26～30℃，180～250rpm的条件摇培5～7d，过滤菌丝后得到疮痂病致病菌发酵液。优选的，所述马铃薯脱毒苗为来自同一马铃薯的茎尖脱毒组培苗。优选的，当马铃薯脱毒苗为试管苗时，所述疮痂病致病菌发酵液的接种量为微型薯诱导培养基体积的2％～4％。优选的，所述生根培养的条件包括：在22～26℃，光周期为14～18h/d的条件下培养12～16d。优选的，所述接种疮痂病致病菌发酵液前的诱导培养的条件包括：在22～26℃，光周期为14～18h/d的条件下培养7～10d。优选的，所述接种疮痂病致病菌发酵液后的诱导培养的条件包括：16～20℃的黑暗环境中培养20～30d。本专利技术提供了一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法，包括：对马铃薯脱毒苗依次进行生根培养和微型薯的诱导培养，诱导培养中接种疮痂病致病菌的发酵液，在继续诱导培养的过程中观察微型薯的产生情况、植株和微型薯的发病情况，根据微型薯病斑的面积和植株的坏死等级，判断马铃薯疮痂病的抗性。本专利技术根据疮痂病致病菌利用致病毒素侵染马铃薯块茎导致病害发生的机理，结合马铃薯脱毒苗组织培养、液体诱导微型薯的技术，鉴定马铃薯疮痂病的抗性。本专利技术提供的鉴定方法鉴定周期控制在40d左右，大大的缩短了鉴定周期；本专利技术提供的鉴定方法无需在田间栽培繁殖种薯，能够有效减少工作量，而且一个试管即可鉴定一个植株，能够节省空间，同时，鉴定的过程在实验室内完成，外界环境可控，能够有效避免污染出现；本专利技术提供的鉴定方法全程在实验室内培养容器内进行，全程可观测；且本专利技术提供的鉴定方法所取的植株为同一马铃薯植株的脱毒苗，生理年龄一致，检测操作过程规范，能够减少其它条件的干扰，保证鉴定结果的一致性和可重复性；本专利技术提供的鉴定方法无需大量人工，能够有效降低鉴定成本。由应用例可知，本专利技术提供的鉴定方法周期仅为44天，鉴定正确率高达100％。附图说明图1为马铃薯资源盆栽温室接种疮痂病菌后块茎感病症状的表现，其中，A：日本抗疮痂，高抗；B：Aquila，中抗；C：672-50，中抗；D：897003，中感；E：Z292，中感；F：bl-1c，高感；G：宁薯15号，高感；H：EarlyOhio，重感；B～H中，上方马铃薯块茎为接种无菌水的对照(CK)，下方马铃薯块茎为接种致病菌孢悬液后，得到的感病块茎；图2为宁薯15号微型薯诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法，包括以下步骤：/n将马铃薯脱毒苗置于生根培养基中进行生根培养，得到生根脱毒苗；/n将生根脱毒苗置于微型薯诱导培养基中进行微型薯的诱导培养，得到微型薯，在诱导培养期间接种疮痂病致病菌发酵液，观察微型薯的产生情况、植株和微型薯的发病情况，根据微型薯病斑面积等级和植株坏死等级，判断马铃薯疮痂病的抗性；/n所述微型薯诱导培养基包括：蔗糖28～32g/L、MS培养基4～5g/L和氯化氯代胆碱9～11mg/L，pH值为5.6～6.0。/n

【技术特征摘要】
1.一种马铃薯疮痂病抗性的鉴定方法，包括以下步骤：
将马铃薯脱毒苗置于生根培养基中进行生根培养，得到生根脱毒苗；
将生根脱毒苗置于微型薯诱导培养基中进行微型薯的诱导培养，得到微型薯，在诱导培养期间接种疮痂病致病菌发酵液，观察微型薯的产生情况、植株和微型薯的发病情况，根据微型薯病斑面积等级和植株坏死等级，判断马铃薯疮痂病的抗性；
所述微型薯诱导培养基包括：蔗糖28～32g/L、MS培养基4～5g/L和氯化氯代胆碱9～11mg/L，pH值为5.6～6.0。


2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，根据微型薯病斑面积等级和植株坏死等级，计算疮痂指数，根据疮痂指数判断马铃薯疮痂病的抗性的方法包括：
根据微型薯病斑的面积确定微型薯病斑面积等级；根据微型薯病斑的面积确定微型薯病斑面积等级的判断方法包括：观察微型薯表面的病斑面积，当微型薯表面无症状，健康时，微型薯病斑面积等级为0级；当0＜微型薯病斑面积≤5％时，微型薯病斑面积等级为1级；当5＜微型薯病斑面积≤12.5％时，微型薯病斑面积等级为2级；当12.5％＜微型薯病斑面积≤25％时，微型薯病斑面积等级为3级；当25％＜微型薯病斑面积≤50％时，微型薯病斑面积等级为4级；当50％＜微型薯病斑面积时，微型薯病斑面积等级为5级；
所述植株坏死等级的判断方法包括：观察植株坏死的部分，当植株健康时，植株坏死等级为1级；当0＜植株坏死≤25％时，植株坏死等级为2级；当25％＜植株坏死≤50％时，植株坏死等级为3级；当50％＜植株坏死时，植株坏死等级为4级；
根据疮痂指数公式确定疮痂指数，所述疮痂指数公式为：疮痂指数＝微型薯病斑面积等级×植株坏死等级/20×100；根据所述疮痂指数确定马铃薯疮痂病的抗性；
所述植株抗性等级的判断方法包括：当0＜疮痂指数≤5时，植株...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂峰杰，巩檑，甘晓燕，张丽，徐利敏，刘璇，任怡莲，杨文静，陈虞超，宋玉霞，黄新玲，
申请(专利权)人：宁夏农林科学院农业生物技术研究中心宁夏农业生物技术重点实验室，
类型：发明
国别省市：宁夏;64