一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒制造技术

本实用新型专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种鸡CSRP3基因荧光定量RT‑PCR试剂盒，其特征是，包括盒体(1)，盒体(1)内设有DNA双链嵌合绿色染料热启动荧光PCR混合物(2)、鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物(3)、定量PCR参比染料(4)、鸡内参基因β‑actin表达的特异性正反向引物(5)、灭菌无核酸酶水(6)。本实用新型专利技术试剂盒准确性高、快速、价格低廉，通过实时荧光定量RT‑PCR技术检测鸡CSRP3基因表达，为研究鸡CSRP3表达调控以及肌肉生长发育调控奠定基础，为优质鸡育种提供理论依据，具有潜在的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒
本技术属于生物
，尤其涉及鸡CSRP3基因表达荧光定量RT-PCR试剂盒，主要用于鸡CSRP3基因表达调控和肌肉生长发育相关的功能研究。
技术介绍
鸡肉由于具有高蛋白、低胆固醇、低脂肪和低热量等特点，已成为世界各地消费者普遍接受的优质动物蛋白质来源。另外，与猪、牛相比，肉鸡具有饲养周期短、饲料转化率高、饲养及加工自动化程度高等优点，因此，鸡肉也是最经济的动物蛋白质来源。目前，鸡肉虽然已成为我国仅次于猪肉的第二大肉类消费品，但鸡肉的人均消费量还远远低于世界发达国家和国际水平，市场增长潜力空间大。随着生活水平的提高和消费观念的转变，色、香、味俱佳且安全的鸡肉越来越受到消费者的青睐。因此，探究骨骼肌生长发育调控机制、保证鸡快速安全生长并保持肉品质的同步改良是当今肉鸡育种工作者面临的重要理论和实践问题。骨骼肌的肌生成是一个十分复杂的过程，受到严格的发育程序调控，依赖于调控因子精确的时空表达。富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白3(Cysteineandglycinerichprotein3,CSRP3)又被称为肌肉LIM蛋白(muscleLIMprotein,MLP)，是肌细胞分化所必需的正向调节因子，缺乏CSRP3的肌细胞，不能被诱导分化；过表达CSRP3时，则肌细胞分化能力增强。另有研究表明，CSRP3在成年动物肌纤维的再次分化中发挥作用。因此研究CSRP3基因的表达调控对于了解鸡骨骼肌肌肉生长发育调控机理具有重要意义。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，本技术试剂盒准确性高、快速、价格低廉，通过实时荧光定量RT-PCR技术检测鸡CSRP3基因表达，为研究鸡CSRP3表达调控以及肌肉生长发育调控奠定基础，为优质鸡育种提供理论依据，具有潜在的应用价值。本技术的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括盒体，盒体内设有DNA双链嵌合绿色染料(SYBRGreenMaster)热启动荧光PCR混合物、鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物、定量PCR参比染料(Rox)、鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物、灭菌无核酸酶水(DEPC)。优选的，所述鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物序列为：F:5，—TGTGGCAAATCGGTGTA—3，R:5，—TCTCCGTCTTTGTCTGTA—3；所述鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物序列为：F:5，—GTCCACCTTCCAGCAGATGT—3，R:5,—ATAAAGCCATGCCAATCTCG—3。优选的，所述盒体一侧设有锁扣，锁扣内置第一磁性件；所述试剂盒还包括外盒，外盒为中空方形体结构，外盒顶板上设置第一侧盖，外盒底板上设置第二侧盖，第一侧盖、第二侧盖上分别设有矩形孔，第一侧盖、第二侧盖内置第二磁性件；盒体内置于外盒内，展开的锁扣穿过第一、二侧盖上的矩形孔并弯折90°，在第一、二磁性件的作用下，锁扣与侧盖吸合，实现外盒与盒体连接与固定。与现有技术相比，本技术具有以下有益效果：第一，本技术CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒及其检测方法，准确性可靠、快速、特异性强、价格低廉，具有灵敏度高、自动化程度高，无污染、实时性好等优点。第二，本技术将试剂盒的结构设计为外盒、外盒内的用于装试剂的盒体结构，对盒体与外盒的连接结构进行优化，在外盒上增设两个侧盖，在内盒上设置可弯折的锁扣，盒体内置于外盒内，展开的锁扣穿过第一、二侧盖上的矩形孔并弯折90°，在第一、二磁性件的作用下，锁扣与侧盖吸合，实现外盒与盒体连接与固定，结构新颖，使用方便。附图说明图1是本技术鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒的盒体结构示意图(锁扣展开)；图2是本技术鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒的盒体结构示意图(锁扣弯折)；图3是本技术鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒的外盒的结构示意图；图4是本技术鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒的整体结构示意图；图5是不同发育时期不同部位肌肉组织中CSRP3基因的相对表达量图。具体实施方式结合具体实施例和附图对本技术作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本技术范围。实施例1如图1-4所示，一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，包括盒体1，盒体1内设有DNA双链嵌合绿色染料(SYBRGreenMaster)热启动荧光PCR混合物2、鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物3、定量PCR参比染料(Rox)4、鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物5、灭菌无核酸酶水(DEPC)6。其中，鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物序列为：F:5，—TGTGGCAAATCGGTGTA—3，R:5，—TCTCCGTCTTTGTCTGTA—3；鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物序列为：F:5，—GTCCACCTTCCAGCAGATGT—3，R:5,—ATAAAGCCATGCCAATCTCG—3。盒体1一侧设有锁扣7，锁扣7内置第一磁性件12。试剂盒还包括外盒8，外盒8为中空方形体结构，外盒顶板上设置第一侧盖9，外盒底板上设置第二侧盖10，第一侧盖9、第二侧盖10上分别设有矩形孔11，第一侧盖9、第二侧盖10内置第二磁性件13。本技术将试剂盒的结构设计为外盒、外盒内的用于装试剂的盒体结构，对盒体与外盒的连接结构进行优化，在外盒上增设两个侧盖，在内盒上设置可弯折的锁扣。盒体1内置于外盒8内，展开的锁扣7穿过第一、二侧盖9、10上的矩形孔并弯折90°，在第一、二磁性件12的作用下，锁扣7与侧盖吸合，实现外盒8与盒体1连接与固定。实施例2：CSRP3基因在鸡不同部位肌肉中的发育性表达变化以自主培育的花山麻鸡为素材，运用本技术对不同发育阶段的鸡不同部位肌肉组织的CSRP3基因进行定量检测。采集0、1、3、5、7、9周龄各个发育时期的鸡胸大肌、比目鱼肌和趾长伸肌组织样品置于液氮速冻后转入-80℃冰箱保存；采用总RNA提取试剂裂解法(Trizol)，从采集到的皮肤样本中提取总RNA，以提取的总RNA为模板，按照RT-PCR试剂盒[宝生物，大连，中国(Takara,Dalian,China)]说明书反转录合成cDNA第一链。实时荧光定量PCR(realtimePCR)扩增反应：采用DNA双链嵌合绿色荧光染料I(SYBRGreenI)染料法，以上述合成的cDNA第一链为模板，设计的鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物和鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物，在Max3000P荧光定量PCR仪(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括盒体(1)，盒体(1)内设有DNA双链嵌合绿色染料热启动荧光PCR混合物(2)、鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物(3)、定量PCR参比染料(4)、鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物(5)、灭菌无核酸酶水(6)。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括盒体(1)，盒体(1)内设有DNA双链嵌合绿色染料热启动荧光PCR混合物(2)、鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物(3)、定量PCR参比染料(4)、鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物(5)、灭菌无核酸酶水(6)。


2.根据权利要求1所述的鸡CSRP3基因荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述鸡CSRP3基因表达的特异性正反向引物序列为：
F:5，—TGTGGCAAATCGGTGTA—3，
R:5，—TCTCCGTCTTTGTCTGTA—3；
所述鸡内参基因β-actin表达的特异性正反向引物序列为：
F:5，—GTCCACCTTCCAGCAGATGT—3，...

【专利技术属性】
技术研发人员：单艳菊，章明，姬改革，束婧婷，巨晓军，刘一帆，屠云洁，邹剑敏，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：新型
国别省市：江苏;32