一种动物胚胎或胎盘的提取工艺制造技术

本发明专利技术提供一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，涉及生物工程领域。该动物胚胎或胎盘的提取工艺，包括以下步骤：S1胎盘与胚胎分离；S2破碎细胞结构；S3粗过滤工作；S4离心分离；S5成分提取（S5.2胚胎成分分离、S5.1胎盘成分分离）。通过如上提取过程，使得动物胎盘与胚胎分离中的层粘连蛋白、纤连蛋白和小分子肽可以以高纯度的状态被提取出来，减少资源的浪费，由于纯度较高可以直接用于研究与产品制备，在使用过氧化氢酶分解过氧化氢后，可以有效防止动物胚胎与胎盘细胞中过氧化氢的作用使其内的蛋白发生不可逆变性，在脂肪酶分解脂肪后，可以便于蛋白质的分离。

【技术实现步骤摘要】
一种动物胚胎或胎盘的提取工艺
本专利技术涉及生物工程领域，具体为一种动物胚胎或胎盘的提取工艺。
技术介绍
胎盘是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官。胎盘与死胚胎中均含有丰富活性多肽和蛋白质。其中蛋白质中的层粘连蛋白、纤连蛋白对人体具有极大的益处，同时也是进行科学研究的前沿蛋白，具有很高的价值，而在畜牧场所，动物生育完胎盘、死胚胎都是直接丢弃，造成极大的浪费。
技术实现思路
（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，解决了动物生育完胎盘、死胚胎直接丢弃，造成浪费的问题。（二）技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，包括以下步骤：S1胎盘与胚胎分离将动物胎盘与胚胎分离，使用10～15℃的去离子水进行清洗，反复清洗三次，剔除胎盘中的骨质结构；S2破碎细胞结构将S1中处理过的动物胎盘或胚胎，进行初步绞碎，接种入过氧化氢酶、脂肪酶，保持适宜的酶解条件，酶解20～24h，之后置于超声波装置中，并在其中加入1.2～1.25倍体积的去离子水，加入与动物胎盘或胚胎重量比为1:12～15的硫酸铵，在30KHZ～80KHZ下处理25～30min；S3粗过滤工作使用0.5～1mm的滤网进行过滤，得到的滤液，过滤下的滤渣返回至S2中再次进行处理；S4离心分离将滤液放入超速离心机中，以8000～15000rad/min的转速分离，在分层后取出蛋白质层；S5成分提取S5.1胎盘成分分离将离心分离后的蛋白质层成分，采用毛细电泳技术分离提纯蛋白质，之后将加入硫酸乙酰肝素糖蛋白，在静置2～3d后，取下层蛋白，即得到层粘连蛋白，将剩余的蛋白质使用石墨烯修饰的二氧化钛吸附，即可在石墨烯修饰的二氧化钛表面得到纤连蛋白，将携带纤连蛋白的石墨烯修饰的二氧化钛在真空中进行离心，即可将纤连蛋白分离出来，石墨烯修饰的二氧化钛往复吸附，并将分离出来的纤连蛋白进行集中收集，将最后剩余的蛋白质进行收集保存；S5.2胚胎成分分离将蛋白质层加入蛋白酶，控制酶解条件至适宜，酶解2～3d，之后加入有机溶剂，之后使用反相高效液相色谱法分离出小分子肽。优选的，所述破碎细胞结构过程与胚胎成分分离中严格保持酶解条件的稳定。优选的，所述S1处理后的动物胎盘与胚胎可在加入保护剂和甘油后冷冻后置于-196℃的液氮中低温保存，所述保护剂的终浓度5%，所述甘油的浓度为15%。优选的，所述有机溶剂为丙酮、异丙醇、正丁酮中的任意一种。优选的，所述S1至S5中工作过程严格无菌，使用设备必须进杀菌处理。（三）有益效果本专利技术提供了一种动物胚胎或胎盘的提取工艺。具备以下有益效果：1、本专利技术，可以将动物胚胎与胎盘在分离后，经过一系列步骤得到纯度很高的层粘连蛋白、纤连蛋白和小分子肽，使动物胚胎与胎盘的利用率达到最高，减少资源的浪费，由于纯度较高可以直接用于研究与产品制备。2、本专利技术，在使用过氧化氢酶、脂肪酶后，动物胚胎与胎盘中的过氧化氢与脂肪，避免了因为动物胚胎与胎盘细胞中过氧化氢的作用使其内的蛋白发生不可逆变性，在分解脂肪后可以便于蛋白质的分离。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例：本专利技术实施例提供一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，包括以下步骤：S1胎盘与胚胎分离将动物胎盘与胚胎分离，使用10～15℃的去离子水进行清洗，反复清洗三次，这样可以清除动物胎盘与胚胎中的血液，以及生产过程中与外界接触而携带的杂物，剔除胎盘中的骨质结构，便于使后期的分离提取更加彻底；S2破碎细胞结构将S1中处理过的动物胎盘或胚胎，进行初步绞碎，接种入过氧化氢酶、脂肪酶，保持适宜的酶解条件，酶解20～24h，这样可以分解动物胎盘或胚胎中的过氧化氢，可以防止过氧化氢使后期分离出来的蛋白质发生变性，使脂肪分解为脂肪酸和甘油，之后置于超声波装置中，并在其中加入1.2～1.25倍体积的去离子水，加入与动物胎盘或胚胎重量比为1:12～15的硫酸铵，在30KHZ～80KHZ下处理25～30min，可使动物胎盘或胚胎的细胞机构；S3粗过滤工作使用0.5～1mm的滤网进行过滤，得到的滤液，过滤下的滤渣返回至S2中再次进行处理，在返回处理过程中可以不再接种过氧化氢酶、脂肪酶；S4离心分离将滤液放入超速离心机中，以8000～15000rad/min的转速分离，在分层后取出蛋白质层，超速离心可以将滤液各组分充分分离，便于后续的提取；S5成分提取S5.1胎盘成分分离将离心分离后的蛋白质层成分，采用毛细电泳技术分离提纯蛋白质，之后将加入硫酸乙酰肝素糖蛋白，硫酸乙酰肝素糖蛋白可以促使层粘连蛋白进行沉降，在静置2～3d后，取下层蛋白，即得到层粘连蛋白，将剩余的蛋白质使用石墨烯修饰的二氧化钛吸附，即可在石墨烯修饰的二氧化钛表面得到纤连蛋白，将携带纤连蛋白的石墨烯修饰的二氧化钛在真空中进行离心，即可将纤连蛋白分离出来，石墨烯修饰的二氧化钛往复吸附，并将分离出来的纤连蛋白进行集中收集，将最后剩余的蛋白质进行收集保存，这些蛋白质可以直接用于S5.2中进行酶解；S5.2胚胎成分分离将蛋白质层加入蛋白酶，控制酶解条件至适宜，酶解2～3d，便于使蛋白质分解彻底，之后加入丙酮、异丙醇、正丁酮中的任意一种有机溶剂，之后使用反相高效液相色谱法分离出小分子肽。破碎细胞结构过程与胚胎成分分离中严格保持酶解条件的稳定，可以保证酶解过程更加彻底。S1处理后的动物胎盘与胚胎可在加入保护剂和甘油后冷冻后置于-196℃的液氮中低温保存，保护剂的终浓度5%，甘油的浓度为15%，可以将大量的胚胎与胎盘进行保存，保障其细胞的活性，防止所需提取的层粘连蛋白与纤连蛋白发生变性。S1至S5中工作过程严格无菌，使用设备必须进杀菌处理。该提取工艺适用于猪、牛、羊的胚胎与胎盘中层粘连蛋白、纤连蛋白和小分子肽的提取。尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，其特征在于：包括以下步骤：/nS1 胎盘与胚胎分离/n将动物胎盘与胚胎分离，使用10～15℃的去离子水进行清洗，反复清洗三次，剔除胎盘中的骨质结构；/nS2 破碎细胞结构/n将S1中处理过的动物胎盘或胚胎，进行初步绞碎，接种入过氧化氢酶、脂肪酶，保持适宜的酶解条件，酶解20～24h，之后置于超声波装置中，并在其中加入1.2～1.25倍体积的去离子水，加入与动物胎盘或胚胎重量比为1:12～15的硫酸铵，在30KHZ～80KHZ下处理25～30min；/nS3 粗过滤工作/n使用0.5～1mm的滤网进行过滤，得到的滤液，过滤下的滤渣返回至S2中再次进行处理；/nS4 离心分离/n将滤液放入超速离心机中，以8000～15000rad/min的转速分离，在分层后取出蛋白质层；/nS5 成分提取/nS5.1 胎盘成分分离/n将离心分离后的蛋白质层成分，采用毛细电泳技术分离提纯蛋白质，之后将加入硫酸乙酰肝素糖蛋白，在静置2～3d后，取下层蛋白，即得到层粘连蛋白，将剩余的蛋白质使用石墨烯修饰的二氧化钛吸附，即可在石墨烯修饰的二氧化钛表面得到纤连蛋白，将携带纤连蛋白的石墨烯修饰的二氧化钛在真空中进行离心，即可将纤连蛋白分离出来，石墨烯修饰的二氧化钛往复吸附，并将分离出来的纤连蛋白进行集中收集，将最后剩余的蛋白质进行收集保存；/nS5.2 胚胎成分分离/n将蛋白质层加入蛋白酶，控制酶解条件至适宜，酶解2～3d，之后加入有机溶剂，之后使用反相高效液相色谱法分离出小分子肽。/n...

【技术特征摘要】
1.一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，其特征在于：包括以下步骤：
S1胎盘与胚胎分离
将动物胎盘与胚胎分离，使用10～15℃的去离子水进行清洗，反复清洗三次，剔除胎盘中的骨质结构；
S2破碎细胞结构
将S1中处理过的动物胎盘或胚胎，进行初步绞碎，接种入过氧化氢酶、脂肪酶，保持适宜的酶解条件，酶解20～24h，之后置于超声波装置中，并在其中加入1.2～1.25倍体积的去离子水，加入与动物胎盘或胚胎重量比为1:12～15的硫酸铵，在30KHZ～80KHZ下处理25～30min；
S3粗过滤工作
使用0.5～1mm的滤网进行过滤，得到的滤液，过滤下的滤渣返回至S2中再次进行处理；
S4离心分离
将滤液放入超速离心机中，以8000～15000rad/min的转速分离，在分层后取出蛋白质层；
S5成分提取
S5.1胎盘成分分离
将离心分离后的蛋白质层成分，采用毛细电泳技术分离提纯蛋白质，之后将加入硫酸乙酰肝素糖蛋白，在静置2～3d后，取下层蛋白，即得到层粘连蛋白，将剩余的蛋白质使用石墨烯修饰的二氧化钛吸附，即可在石墨烯修饰的二氧化钛表面得...

【专利技术属性】
技术研发人员：许帅辉，赵悦华，赵水，常明利，
申请(专利权)人：许帅辉，
类型：发明
国别省市：河南;41