高糖饮食诱导的早期干性年龄相关性黄斑变性色素兔模型制造技术

本发明专利技术公开了一种高糖饮食诱导的早期干性年龄相关性黄斑变性色素兔模型的构建方法，属于眼科疾病动物模型领域。本发明专利技术的方法包括：在青紫蓝兔维持饲料中添加重量比40％的蔗糖，持续饲喂青紫蓝兔24周。本发明专利技术的方法仅需饮食控制，即可使动物产生年龄相关性黄斑变性的症状，简单便捷，易于产业化应用。

【技术实现步骤摘要】
高糖饮食诱导的早期干性年龄相关性黄斑变性色素兔模型
本专利技术属于眼科疾病动物模型领域。
技术介绍
年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)是导致发达地区50岁以上人群不可逆性盲的首要病因。中国由于人口老龄化日趋严重，AMD也已成为重要的致盲性眼病。由于发病机制不清，一直是眼科临床工作的重点及难点。AMD根据发病阶段分为早期AMD和晚期AMD，前者以早期的玻璃膜疣、视网膜色素上皮层(RPE)和光感受器细胞改变，即干性(萎缩性)AMD为特征，也会进展为脉络膜新生血管(CNV)，即湿性(渗出性)AMD；晚期AMD以累及黄斑中心的地图样萎缩为特点。临床上约90％的患者为干性AMD。虽然目前对于湿性AMD的诊断和治疗研究(如抗VEGF治疗)有了很大的进展，但是对于早期干性AMD和晚期地图样萎缩，迄今仍无有效的治疗和预防措施。此外，由于医学伦理的限制，多数对AMD在视网膜脉络膜结构、功能及生化方面的研究不能直接以人作为研究对象，临床标本来源困难，干性AMD成为AMD研究的瓶颈，因此需要选择合适的动物疾病模型来指导其研究，通过模拟人早期干性AMD的结构、功能及代谢特征来探索其发病机制和开发新型治疗以期阻止或者延缓干性AMD进程。目前的早期干性AMD动物模型主要有基因敲除模型、药物诱导模型、光损伤视网膜模型等。转基因/基因编辑模型主要针对于AMD相关基因进行基因敲除(例如：单核细胞趋化因子2、载脂蛋白E)，但其周期长，成模率低，对人员设备要求高，不适合推广应用。r>药物诱导模型是通过眼注射碘酸钠、聚乙二醇等药物，对人员技术要求高，且容易导致视网膜发生不可逆的急性损坏，不适合AMD模型研究。光损伤模型是用蓝光照射动物，光线入眼后可诱发视紫红质、脂褐素等感光分子产生活性氧，导致感光细胞外节盘膜的脂质过氧化，诱导感光细胞凋亡，对视网膜造成损伤。该方法需要精准可控的蓝光发生装置，对设备有较高要求。上述主流方法存在周期长、对人员设备要求高或对动物伤害过重等问题，不利于产业化应用。在动物日常饮食中额外添加脂肪和糖(即“高脂高糖饮食”)，曾被认为是一种简单可行的早期干性AMD造模方法。专利技术人前期用8-13岁雄性老年恒河猴作为对象，发现喂养18-24月后，均未见脉络膜及视网膜色素上皮的显著改变，即无法成功造模。CN107787912A公开了一种干性AMD造模方法，是将蔗糖、猪油、胆固醇、胆酸盐按质量比5～15：5～15:0.5～1.5:0.1～1.0的比例进行混合，制备成半流质膳食，通过鼻饲管每天灌注一次(该配方必须人工灌注，否则猴子在摄入一定量饲料后就不再摄入)，每天灌注9.2～17.2g/kg体重，持续15个月。其周期长，人工灌注操作繁琐，不适用于产业化应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是：提供一种简单有效的早期干性AMD动物模型的构建方法。本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术首先提供了一种早期干性黄斑变性色素兔模型的构建方法，它包括：每日使色素兔摄入36～67.5g蔗糖，持续16～30周。进一步的，所述构建方法包括：每日使色素兔摄入40～60g蔗糖，持续16～30周。进一步的，所述蔗糖是按重量比36％～45％添加到兔维持饲料中，制成高糖饲料，对色素兔进行饲喂，每日饲喂高糖饲料100～150g；优选地，所述蔗糖按重量比40％添加到兔维持饲料中。进一步的，所述兔维持饲料含有：20～27％(w/w)蛋白质、8～14％(w/w)脂肪和60～70％(w/w)碳水化合物；优选地，所述兔维持饲料含有：23.5％(w/w)蛋白质、11％(w/w)脂肪和65.5％(w/w)碳水化合物。进一步的，所述色素兔为青紫蓝兔；和/或，所述模型是早期干性年龄相关性黄斑变性。进一步的，所述饲喂的具体方式为：对每只兔上午饲喂40-60g，下午饲喂60-90g。本专利技术还提供了前述方法得到的模型在药物筛选中的用途，所述药物为治疗早期干性年龄相关性黄斑变性的药物。本专利技术还提供了一种用于构建早期干性年龄相关性黄斑变性色素兔模型的兔饲料，所述兔饲料是在兔维持饲料中添加重量比36～40％的蔗糖制备而成；所述兔维持饲料含有：20～27％(w/w)蛋白质、8～14％(w/w)脂肪和60～70％(w/w)碳水化合物。进一步的，所述兔饲料含有重量比40％的蔗糖。进一步的，述兔维持饲料含有：23.5％(w/w)蛋白质、11％(w/w)脂肪和65.5％(w/w)碳水化合物。术语“色素兔”指，含有色素眼的兔品种(即非白化兔)。本专利技术的有益效果：本专利技术以色素兔青紫蓝兔作为对象，饲喂高糖饮食，仅需24周，即可成功使青紫蓝兔表现出早期干性AMD症状。该方法克服了基因敲除模型、药物诱导模型、光损伤视网膜模型等方法的周期长、对人员设备要求高或对动物伤害过重等问题，且无需人工灌注干预进食，十分快捷便利。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1：血糖水平；左，高糖组(HSD)和对照组之间血糖水平比较；右，高糖组(HSD)和对照组之间IVGTT的AUC值比较。图2：血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平比较。图3：眼底炫彩照相(Multicolor)、光学相干断层扫描(OCT)和自发荧光检测图；标尺＝500μm。图4：荧光素血管造影(FFA)检测图；标尺＝500μm。图5：HE染色、甲苯胺蓝染色结果；标尺＝100μm图6：免疫荧光染色和血管覆盖面积统计；标尺＝100μm图7：视网膜电图(ERG)检测结果。具体实施方式实施例1模型构建1.方法1.1建模将16周龄体重3.5±0.5kg的成年雄性青紫蓝兔分成两组，各10只，对照组(ND)饲喂兔维持饲料(北京科澳协力饲料有限公司)，高糖组(HSD)则饲喂高糖饲料，每天饲喂的量为每天饲喂的量为上午40-60g，下午60-90g。所述维持饲料的营养成分：23.5％(w/w)蛋白质,11％(w/w)脂肪以及65.5％(w/w)碳水化合物；能量：2.7kcal/g。所述高糖饲料是在维持饲料的基础上，按重量比加入40％的蔗糖。1.2检测1)血液检查检测时间：建模前及建模后8、12、16、24周；检测指标：血糖(GLU)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NFFA)、高本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种早期干性黄斑变性色素兔模型的构建方法，其特征在于，它包括：/n每日使色素兔摄入36～67.5g蔗糖，持续16～30周。/n

【技术特征摘要】
1.一种早期干性黄斑变性色素兔模型的构建方法，其特征在于，它包括：
每日使色素兔摄入36～67.5g蔗糖，持续16～30周。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于：它包括：
每日使色素兔摄入40～60g蔗糖，持续16～30周。


3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述蔗糖是按重量比36％～45％添加到兔维持饲料中，制成高糖饲料，对色素兔进行饲喂，每日饲喂高糖饲料100～150g；
优选地，所述蔗糖按重量比40％添加到兔维持饲料中；
进一步优选地，饲喂时间为24周。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
所述兔维持饲料含有：
20～27％(w/w)蛋白质、8～14％(w/w)脂肪和60～70％(w/w)碳水化合物；
优选地，所述兔维持饲料含有：
23.5％(w/w)蛋白质、11％(w/w)脂肪和65.5％(w/w)碳水化合物。


5.如权利要求1所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：王钰娇，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51