基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法技术

本发明专利技术公开了一种基于Halo‑tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，该方法将Halo‑tag基因重组至目标受体蛋白非活性C末端，通过酰化反应将卤代烷酸修饰至分离介质表面，诱导表达后，利用重组受体C末端脱卤素酶与分离介质表面卤代烷的特异性脱卤反应，实现了细胞裂解液中Halo‑tag重组受体的一步定向共价固定化，建立了蛋白质一步定向固定化新方法，由于通过细胞裂解液即可实现蛋白质的一步高特异性固定，所以有效解决了蛋白质固定化周期长及蛋白质固定化方法特异性低的问题。

【技术实现步骤摘要】
基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法
本专利技术涉及一种蛋白质固定化方法，具体涉及一种基于卤代烷烃脱卤素酶(Halo-tag)特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，属于蛋白质固定

技术介绍
目前，文献报道的蛋白质固定化方法可分为：物理吸附法、化学键合法和基于特异性标签亲和作用的固定化方法。在上述三种方法中：(1)物理吸附法就是通过非特异性吸附作用将蛋白质固定在固体基质表面。虽然该方法在蛋白质的固定化过程中操作最为简便，但是由于该方法是通过非特异性吸附作用将蛋白质固定于固体材料表面，对于目的蛋白质的选择性较低，在进行固定化时，首先需对目的蛋白质进行纯化，因此往往造成蛋白质固定化方法操作周期长、操作冗杂的不足。(2)化学键合法就是通过与蛋白质表面暴露出的氨基、羧基、巯基等发生化学反应，进而将蛋白质固定于载体表面。该方法同样需要大量高纯度的蛋白质，并且固定化后蛋白质的活性位点易于被掩盖，蛋白质活性损失大。(3)基于特异性标签亲和作用的固定化方法就是将常用蛋白质标签(如组氨酸标签、谷胱甘肽转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：/nStep1：卤代烷酸修饰分离介质/n将卤代烷酸修饰至分离介质表面，获得卤代烷酸修饰的分离介质；/nStep2：Halo-tag融合蛋白质的一步定向固定化/n将Step1获得的卤代烷酸修饰的分离介质与细胞裂解液中表达的Halo-tag融合蛋白质在pH＝7.0、浓度为5mM的乙酸铵溶液中孵育15min。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：
Step1：卤代烷酸修饰分离介质
将卤代烷酸修饰至分离介质表面，获得卤代烷酸修饰的分离介质；
Step2：Halo-tag融合蛋白质的一步定向固定化
将Step1获得的卤代烷酸修饰的分离介质与细胞裂解液中表达的Halo-tag融合蛋白质在pH＝7.0、浓度为5mM的乙酸铵溶液中孵育15min。


2.根据权利要求1所述的基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，其特征在于，在Step1中，所述卤代烷酸为：6-氯己酸、6-溴己酸、6-氟己酸、6-碘己酸或上述卤素的所有饱和酸。


3.根据权利要求1所述的基于Halo-tag特异性脱卤反应的蛋白质一步定向固定化方法，其特征在于，在Step1中，所述分离介质为：羟基化、氨基化、巯基化或羧基化修饰的树脂微球或多孔微球。


4.根据权利要求1所述的基于Halo-...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵新锋，李倩，王静，曾凯竹，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61