本发明专利技术公开了一种果糖胺测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中R1试剂pH为10.0～10.8，包括：200～500mmol/L碱性缓冲液、1～10g/L金属盐、0.5～2g/L Emulgen A90和Emulgen B66等体积比混合物、0.5～2g/L防腐剂；R2试剂pH为4.0～5.0，包括：5mmol/L～25mmol/L酸性缓冲液、0.5～2g/L异丙胺烷基苯磺酸盐；1～5g/L NBT以及0.5～2g/L防腐剂。本发明专利技术通过在R1试剂中特殊选取Emulgen A90和Emulgen B66的等体积比混合物，与强碱性环境配合，以有效清除血清样本中的干扰物；并且在R2试剂中将酸性环境与异丙胺烷基苯磺酸盐配合使用，并适当降低其中缓冲液的浓度，以增强NBT的溶解度和试剂稳定性，同时提高了试剂的精密度和线性范围，从而得到了一种抗干扰能力和稳定性显著增强，且试剂的线性和精密度也更优异的果糖胺测定试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
一种果糖胺测定试剂盒
本专利技术属于临床化学检测
，具体涉及一种果糖胺测定试剂盒。
技术介绍
果糖胺是血浆中的蛋白质在葡萄糖非酶糖化过程中形成的一种物质，它的浓度与血糖水平成正相关，并相对保持稳定，并且果糖胺的测定不受血糖的影响。由于血浆蛋白的半衰期为17～20天，故果糖胺可以反映糖尿病患者检测前1～3周内的平均血糖水平。从一定程度上弥补了糖化血红蛋白不能反映较短时期内血糖浓度变化的不足，是临床糖尿病人较长时间血糖控制水平的研究指标。果糖胺的测定方法有多种，主要是化学法和层析法。其中化学法包括硫代巴比妥酸法和硝基四氮唑蓝(NBT)法等，而目前应用最广的方法是NBT法，即在碱性条件下，样品中的果糖胺能与NBT起显色反应，其颜色深浅与果糖胺含量成正比。如专利CN101135688A公开了血清中果糖胺NBT测定方法，包括R1试剂和R2试剂，其中R1包括NBT反应成分，pH为中性，R2为碱性碳酸钾缓冲液。然而在检测过程中，血清样本中会存在抗坏血酸、胆红素、胆固醇等还原性物质的干扰，从而影响果糖胺检测结果的准确性，而仅依赖强碱性环境难以有效解决所有干扰问题；其次NBT的溶解性较差，因此试剂长期放置的过程中会出现底物析出的现象，从而影响了检测试剂的稳定性和检测准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种果糖胺测定试剂盒，分别对R1试剂和R2试剂进行优化，通过特殊选取EmulgenA90和EmulgenB66的等体积比混合物，与强碱性环境配合，可有效去除样本中还原性物质的干扰；同时适当降低R2试剂的pH值，并加入具有增溶稳定作用的异丙胺烷基苯磺酸盐，以促进NBT的溶解，从而得到一种抗干扰能力和稳定性显著增强，并且试剂的线性和精密度也更优异的果糖胺测定试剂盒。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种果糖胺测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中所述R1试剂的pH为10.0～10.8，包括：所述R2试剂的pH为4.0～5.0，包括：本技术方案的原理是：首先对用于处理血清样本的R1试剂进行优化，在强碱性环境的基础上，特殊选取了EmulgenA90和EmulgenB66的等体积比混合物，与强碱性环境配合使用，以有效清除血清样本中胆固醇类、抗坏血酸等还原性物质的干扰，从而显著提高试剂的抗干扰能力；同时R2试剂中通过酸性环境和异丙胺烷基苯磺酸盐配合使用，以有效增强NBT的溶解性和稳定性，同时还可进一步提高试剂的精密度和线性。并且为避免R1、R2试剂混合后，R2试剂的低pH影响果糖胺与NBT反应所需的碱性环境，因此适当降低了R2试剂中缓冲液的浓度，从而得到了上述R1试剂和R2试剂的配方。优选地，所述R1试剂的pH为10.5，包括：所述R2试剂的pH为4.5，包括：优选地，所述R1试剂中所述碱性缓冲液为Na2CO3-NaHCO3缓冲液或K2CO3-KHCO3缓冲液。优选地，所述R2试剂中所述酸性缓冲液为甘氨酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中的一种或多种。优选地，所述R1试剂中所述金属盐为氯化钠、氯化钾、碘化钾、谷氨酸钠、草氨酸钠、氯化锂、L-乳酸锂中的一种或多种。优选地，所述R1试剂和所述R2试剂中防腐剂为叠氮化钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、Proclin系列中的一种或多种。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术在R1试剂中特殊选取了EmulgenA90和EmulgenB66的等体积比混合物，与强碱性环境配合，以有效清除血清样本中的干扰物；并且在R2试剂中将酸性环境与异丙胺烷基苯磺酸盐配合使用，并适当降低R2试剂中缓冲液浓度，以增强NBT的溶解度和试剂稳定性，同时还提高了检测试剂的精密度和线性范围，从而得到了一种抗干扰能力和稳定性显著增强，并且试剂的线性和精密度也更优异的果糖胺测定试剂盒。具体实施方式下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1R1试剂的优化本实施例主要对R1试剂进行优化，其中R1试剂中包括：250mmolNa2CO3-NaHCO3缓冲液，5g/LNaCl，1g/L叠氮化钠以及Emulgen系列表面活性剂(均为花王公司产品)。其中主要对Emulegen系列表面活性剂的具体物质选取以及浓度进行优化，具体如下表所示：组别Emulegen系列表面活性剂浓度1EmulgenA90：EmulgenB66＝1:11g/L2EmulgenA901g/L3EmulgenB661g/L4EmulgenA90：Emulgen430＝1:11g/L5EmulgenB66：EmulgenA60＝1:11g/L6EmulgenA500：Emulgen709＝1:11g/L7EmulgenA90：EmulgenB66＝1:10.5g/L8EmulgenA90：EmulgenB66＝1:12g/L9EmulgenA90：EmulgenB66＝1:12.5g/L10无表面活性剂0g/LR2试剂则为常规试剂，具体包括：pH7.5100mmol/LTris-HCl缓冲液，2g/LNBT，1g/L叠氮化钠。试剂盒的使用方法与常规方法相同，具体为：每15μL样本中先加入240μLR1试剂进行处理，37℃恒温5min后加入60μLR2试剂，37℃恒温4min后在60秒内准确测定平均每分钟吸光度变化率ΔA/min。性能评价：按照常规的试剂盒抗干扰能力评价方法，对上述10组得到的试剂盒进行抗坏血酸、胆红素、甘油三酯和血红蛋白的抗干扰能力研究，分别按各干扰物质的最大浓度配制不同浓度梯度并加入至待测样本中，计算测量值与准确值间的相对偏差。结果如表1所示。表1抗干扰能力评价根据表1的结果可知，表面活性剂不同类型的选取(组1-6)以及添加浓度的不同(组7-10)均会对试剂的抗干扰能力产生一定的影响，并且仅有当表面活性剂为1:1的EmulgenA90和EmulgenB66，且添加浓度为0.5～2g/L时，试剂的抗干扰能力低于10％，符合临床使用需求，并且当等体积比的EmulgenA90和EmulgenB66的添加浓度为1g/L时，试剂的抗干扰能力最强。实施例2R2试剂的优化本实施例中R1试本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种果糖胺测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其特征在于，所述R1试剂的pH为10.0～10.8，包括：/n
【技术特征摘要】
1.一种果糖胺测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其特征在于，所述R1试剂的pH为10.0～10.8，包括：
所述R2试剂的pH为4.0～5.0，包括：
2.根据权利要求1所述的一种果糖胺测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的pH为10.0～10.8，包括：
所述R2试剂的pH为4.0～5.0，包括：
3.根据权利要求1或2所述的一种果糖胺测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中所述碱性缓冲液为Na2CO3-NaHCO3缓冲液或K2CO...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴年芬，龚婷，梁艳，张雪娇，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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