本发明专利技术提供了HO‑1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒、诊断试剂盒中的应用，属于生物技术领域，它解决了现有HO‑1在乳腺癌中的表达以及其细胞核染色在乳腺癌发生、发展中的作用尚未见详细报道等问题，HO‑1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒中的应用,以HO‑1蛋白作为分子标记，利用HO‑1单克隆抗体或HO‑1多克隆抗体，结合实验试剂，检测HO‑1蛋白在乳腺癌组织中的相对表达量。本发明专利技术具有HO‑1蛋白与乳腺癌的发生发展联系密切等优点。
【技术实现步骤摘要】
HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒、诊断试剂盒中的应用
本专利技术属于生物
，特别涉及HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒、诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
乳腺癌具有极大的异质性，难以进行准确的诊断和治疗。乳腺癌患者有不同的受体表达谱，临床上应用最广的包括雌激素受体(EstrogenReceptor，ER)，孕激素受体(ProgesteroneReceptor，PR)以及人表皮生长因子受体2(HumanEpidermalGrowthFactorReceptor-2，Her-2)。Her-2作为酪氨酸激酶受体属于EGFR/ErbB家族的被发现经常在乳腺癌中被上调。Her-2基因与乳腺癌相关性最大，其与ER、PR共同决定了乳腺癌分子类型分类，ER、PR和Her-2均阴性的乳腺癌定义为三阴性乳腺癌，至少其中之一阳性的统称为非三阴性乳腺癌，可根据其表达情况进一步分为LuminaA型、LuminaB型及Her-2过表达型。乳腺癌分子分型在预后评估及靶向治疗等方面发挥极其重要的作用。由于乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)的治疗手段有限，患者的预后相对较差，目前尚缺少评价其预后的有效指标和工具，为了实现个性化或更精确的治疗，更加细化的肿瘤分子特征系统需要得到建立。乳腺癌预后检测手段的提高和试剂盒的开发会填补这样的空白。因此，本领域迫切需要为乳腺癌的诊断和治疗提供新的标志物，寻找乳腺癌预后的基因和/或蛋白，该研究对临床乳腺癌预后评估具有重要意义。虽然现在有大量新的抗癌试剂正在开发和临床试验中，但对乳腺癌的治疗仍局限在ER，PR，Her-2等靶标上。例如针对ER，PR阳性患者使用内分泌治疗，针对Her-2高表达的患者应用曲妥珠单抗等。所以，为了在乳腺癌诊断、治疗和预后评估上有所突破，寻找新的标记物和靶标具有十分重要的临床意义。血红素氧化酶(HemeOxygenase,HO)在血红素代谢过程中起到至关重要的作用，它可以将血红素分解转化为胆绿素、一氧化碳和亚铁离子，是血红素代谢中的限速酶。HO-1是一种应激反应酶系统成员，在应激(如炎症，凋亡，缺血和缺氧)条件下的组织器官中，HO-1存在过度表达情况，这是细胞重要的保护机制。在肿瘤细胞中，多项研究提示其表达增高在癌症进展中发挥作用。HO-1在肿瘤细胞中会产生抗凋亡作用，有利于肿瘤细胞生长,且在癌细胞的恶性转化中起重要作用。同时，HO-1与肿瘤对化学治疗，放射治疗和光动力疗法产生抵抗性有关。抑制HO-1能够使癌细胞重新恢复对上述治疗的敏感性。HO-1是一种内质网锚定蛋白质，大多数情况下表达在细胞质中，但是在特定情况下也可转移到细胞核中。目前研究发现，HO-1核定位现象也在前列腺癌，肺癌和口腔癌细胞中可见，并与肿瘤进展有关。HO-1在乳腺癌中的研究也有报道，RuiDeng等人发现HO-1抑制剂ZnPPIX在接种乳腺癌细胞株4T1小鼠中有抑制小鼠肿瘤生长的作用，同时有HO-1表达下降趋势，提示HO-1和肿瘤生长相关。但HO-1在乳腺癌中的表达以及其细胞核染色在乳腺癌发生、发展中的作用尚未见详细报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提供了HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒、诊断试剂盒中的应用。本专利技术的第一个目的可通过下列技术方案来实现：HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒中的应用,其特征在于，以HO-1蛋白作为分子标记，利用HO-1单克隆抗体或HO-1多克隆抗体，结合实验试剂，检测HO-1蛋白在乳腺癌组织中的相对表达量。优选的，所述的实验试剂为免疫组化实验试剂。优选地，所述的免疫组化实验试剂包括磷酸缓冲盐溶液、柠檬酸盐缓冲液、无水乙醇、无水甲醇、山羊血清、DAB显色液、生物素标记羊抗鼠IgG。优选地，使用所述的试剂盒在体外检测HO-1蛋白在乳腺癌组织中的表达量，其检测方法包括以下步骤：S01：利用所述试剂盒中的磷酸缓冲盐溶液、柠檬酸盐缓冲液、无水乙醇、无水甲醇、山羊血清、DAB显色液、生物素标记羊抗鼠IgG将乳腺癌组织切片进行免疫组化染色；S02：在双向显微镜下观察染色结果；S03：免疫组化积分打分法对染色结果分别进行评分；S04：根据评分将乳腺癌组织中HO-1蛋白分子分为高表达量和低表达量。本专利技术的第二个目的可通过下列技术方案来实现：HO-1蛋白在乳腺癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述的乳腺癌诊断试剂盒以HO-1蛋白作为诊断标记物。本专利技术的原理：本专利技术的主要内容是提供HO-1蛋白的新应用，采用免疫组化方法检测HO-1蛋白在乳腺癌组织中的表达，分析HO-1的表达和乳腺癌临床病理指标之间的相关性，基于HO-1蛋白的相对表达量与乳腺癌的这种相关性，以该蛋白作为分子标记对其表达量进行检测可以用于指导乳腺癌的预后判断，在此基础上完成了本专利技术。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1、本专利技术阐述一种在乳腺癌细胞中高表达的蛋白HO-1(而在良性组织中表达较低)，HO-1表达的显著增高提示乳腺癌的存在，为乳腺癌的诊断提供新的标志物。与非三阴性乳腺癌相比，HO-1在三阴性乳腺癌中表达较高，提示其表达与乳腺肿瘤分子分型相关。2、本专利技术通过回顾性分析证明HO-1蛋白与乳腺癌临床病理因素之间存在相关性，提示HO-1蛋白与乳腺癌的发生发展联系密切。3、本专利技术评估了HO-1在肿瘤亚细胞层次的染色情况，发现少数乳腺癌标本中也存在细胞核染色。将此与患者临床病理因素做方差分析比较发现其并与肿瘤组织学分级相关，组织学分级三级的患者HO-1染色明显较一级和二级较低。在分子分型上，非三阴性乳腺癌HO-1细胞核染色率较三阴性乳腺癌高。提示HO-1在乳腺癌中的核定位倾向于降低肿瘤的恶性程度，作为一种保护机制改善患者预后。4、本专利技术进一步通过OSbrca数据库验证，证明HO-1表达量呈现与不良预后正相关性，包括总体生存期与无病生存期。5、本专利技术采用免疫组织化学染色技术检测临床乳腺癌及纤维腺瘤病理组织包括胞浆和胞核中HO-1表达的情况，并回顾分析HO-1与乳腺癌临床病理特征和预后的关系，开发HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒中的应用，为未来研究HO-1在乳腺癌的分子机制及进一步指导临床诊疗提供研究基础。附图说明图1是本专利技术纤维腺瘤染色呈阴性的显微镜图；图2是本专利技术纤维腺瘤染色呈阳性的显微镜图；图3是本专利技术非三阴乳腺癌染色呈阴性的显微镜图；图4是本专利技术非三阴乳腺癌染色呈阳性的显微镜图；图5是本专利技术三阴性乳腺癌染色呈阴性的显微镜图；图6是本专利技术三阴性乳腺癌染色呈阳性的显微镜图；图7是本专利技术非三阴乳腺癌核染呈阴性的显微镜图；图8是本专利技术图7的放大图；图9是本专利技术非三阴乳腺癌核染阳性的显微镜图；图10是本专利技术图9的放大图；图11是本专利技术三阴性乳腺癌核染呈阴性的显微镜图；图12是本专利技术图11的放大图；图13是本专利技术三阴性乳腺癌核染呈阳性的显微镜图；图14是本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒中的应用,其特征在于，以HO-1蛋白作为分子标记，利用HO-1单克隆抗体或HO-1多克隆抗体，结合实验试剂，检测HO-1蛋白在乳腺癌组织中的相对表达量。/n
【技术特征摘要】
1.HO-1蛋白在乳腺癌预后评估试剂盒中的应用,其特征在于，以HO-1蛋白作为分子标记，利用HO-1单克隆抗体或HO-1多克隆抗体，结合实验试剂，检测HO-1蛋白在乳腺癌组织中的相对表达量。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于，所述的实验试剂为免疫组化实验试剂。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于，所述的免疫组化实验试剂包括磷酸缓冲盐溶液、柠檬酸盐缓冲液、无水乙醇、无水甲醇、山羊血清、DAB显色液、生物素标记羊抗鼠IgG。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于，使用所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：花春艳，王文茜，孙维建，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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