一种DNA提取液以及芝麻叶片基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种DNA提取液以及芝麻叶片基因组DNA的提取方法，属于生物技术领域。本发明专利技术的DNA提取液，包括以下浓度的组分：1.2～1.8mol·L

【技术实现步骤摘要】
一种DNA提取液以及芝麻叶片基因组DNA的提取方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种DNA提取液以及芝麻叶片基因组DNA的提取方法。
技术介绍
在作物的遗传多样性分析及基因定位实验中，往往需要大批量提取基因组DNA用于PCR扩增。传统的CTAB法具有通用性广、稳定性高的优点，因此应用较为广泛。然而其操作繁琐、耗时久的缺点使其难以满足大量样本DNA快速提取的要求，同时提取过程中需要使用氯仿、苯酚等有毒有害试剂，对操作人员的健康带来威胁，实验后产生的废弃物垃圾也可能会对环境产生污染。生物公司开发出的植物基因组DNA提取试剂盒主要利用蛋白酶水解蛋白质，使基因组DNA与蛋白质分离，并通过离心柱收集DNA，使用这种试剂盒提取的DNA浓度高、质量好，且不使用氯仿等有毒有害试剂，但这些试剂盒费用昂贵，且DNA提取仍需1h以上的时间，因此也不适合作为大量植物样本DNA提取的用途。随后科研人员相继研发出碱裂解法、沸水浴法等快速提取植物基因组DNA的方法，虽然这些方法可以在短时间内提取出植物基因组DNA，但是提取的DNA含量低且质量差，以其作为PCR反应的模板容易导致PCR扩增的失败。因此，开发出一种快速、环保、耗费低廉的植物基因组DNA提取方法对于作物遗传多样性分析及基因定位实验显得尤为重要。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种DNA提取液以及芝麻叶片基因组DNA的提取方法，利用本专利技术DNA提取液提取芝麻叶片基因组DNA的提取方法，具有提取时间短、提取DNA浓度高、环保、耗费低的特点。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种DNA提取液，包括以下浓度的组分：1.2～1.8mol·L-1的氯化锂，20～40mmol·L-1的EDTA，2～6g·L-1的PVP-4000。优选的，包括以下浓度的组分：1.6mol·L-1的氯化锂，30mmol·L-1的EDTA，3g·L-1的PVP-4000。本专利技术还提供了一种提取芝麻叶片基因组DNA的方法，用所述DNA提取液提取芝麻叶片中的基因组DNA。优选的，包括：将芝麻叶片破碎后，用所述DNA提取液进行提取，离心得到上清液；所述上清液与异丙醇混合，离心，得到的沉淀即为芝麻叶片基因组DNA。优选的，所述破碎的方式为研磨。优选的，所述芝麻叶片与所述DNA提取液的质量体积比为(0.03～0.07)g:(600～800)ul。优选的，在所述得到上清液步骤中，所述离心的转速为10000～15000rpm，时间为2～4min。优选的，在所述得到沉淀步骤中，所述离心的转速为10000～15000rpm，时间为8～12min。优选的，所述异丙醇提前放在-20℃冰箱中预冷。优选的，所述芝麻叶片不包含叶脉部分。相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种DNA提取液，包括氯化锂、EDTA和PVP-4000，其中，氯化锂使基因组DNA从染色体上分离出来；EDTA能螯合金属离子，降低DNA水解酶的活性，进而而起到保护DNA的作用；PVP-4000能除去酚类、多糖类物质，进而提高DNA的纯度。本专利技术将该DNA提取液用于提取芝麻叶片基因组DNA。实验结果表明，相比于传统的CTAB法、试剂盒法、碱裂解法，本专利技术利用所述DNA提取液进行提取的方法，在提取芝麻基因组DNA时，不仅能保证所提取的DNA浓度高、完整性好，可作为模板用于PCR扩增，还能节省提取的时间，并且耗费低、安全环保。附图说明图1为四种DNA提取方法提取的芝麻基因组DNA琼脂糖凝胶电泳的结果；其中1、2、3、4分别为传统CTAB法、试剂盒法、本专利技术提取法、碱裂解法；图2为SSR引物Sa33对四种方法提取的芝麻基因组DNA的扩增结果；其中1、2、3为传统CTAB法，4、5、6为试剂盒法，7、8、9为本专利技术提取法，10、11、12为碱裂解法。具体实施方式本专利技术提供了一种DNA提取液，包括以下浓度的组分：1.2～1.8mol·L-1的氯化锂，20～40mmol·L-1的EDTA，2～6g·L-1的PVP-4000。本专利技术所述氯化锂购自上海生工生物股份有限公司、EDTA购自西陇化工股份有限公司、PVP-4000购自北京索莱宝科技有限公司。本专利技术所述DNA提取液中包括氯化锂，所述氯化锂的浓度优选为1.6mol·L-1。本专利技术所述氯化锂能够使基因组DNA从染色体上分离出来。为确定氯化锂的合适浓度，在EDTA和PVP-4000浓度不变的基础上，通过改变氯化锂的浓度，测定相应芝麻叶片DNA浓度，具体结果见表1。表1不同氯化锂浓度对提取芝麻叶片DNA浓度的影响由表1可知，氯化锂的浓度在0.2mol·L-1以上时，即可提取出芝麻叶片基因组DNA，当氯化锂的浓度在1.6mol·L-1时，所提芝麻叶片DNA浓度已经达到最高286.6ng·ul-1，随着氯化锂浓度的增加，所提芝麻叶片DNA浓度没有明显增加。所以，本专利技术所述氯化锂的浓度优选为1.6mol·L-1。本专利技术所述DNA提取液中包括EDTA，所述EDTA的浓度优选为30mmol·L-1。本专利技术所述EDTA能螯合金属离子，降低DNA水解酶的活性。为确定EDTA的合适浓度，在氯化锂和PVP-4000浓度不变的基础上，通过改变EDTA的浓度，测定相应芝麻叶片DNA浓度，具体结果见表2。表2不同EDTA浓度对提取芝麻叶片DNA浓度的影响由表2可知，当EDTA浓度小于30mmol·L-1时，随着EDTA浓度的升高，芝麻叶片基因组DNA随之升高，当EDTA浓度大于30mmol·L-1时，提取得到的芝麻叶片基因组DNA浓度并不相应升高。所以，本专利技术所述EDTA的浓度优选为30mmol·L-1。本专利技术所述DNA提取液中包括PVP-4000，所述PVP-4000的浓度优选为3g·L-1。本专利技术所述PVP-4000指的是分子量为4000的聚乙烯吡咯烷酮。本专利技术所述PVP-4000能除去酚类、多糖类物质，进而提高DNA的纯度。为确定PVP-4000的合适浓度，在氯化锂和EDTA浓度不变的基础上，通过改变PVP-4000的浓度，测定相应芝麻叶片DNA浓度和纯度，具体结果见表3。表3不同PVP-4000浓度对提取芝麻叶片DNA浓度和纯度的影响由表3可知，当PVP-4000浓度为3g·L-1时，所提芝麻叶片DNA浓度、纯度已经较佳，降低PVP-4000浓度会使所提DNA纯度较低，再增加PVP-4000浓度对DNA纯度无影响，但是会降低所提DNA浓度。所以，本专利技术所述PVP-4000的浓度优选为3g·L-1。本专利技术还提供了一种提取芝麻叶片基因组DNA的方法，用上述DNA提取液提取芝麻叶片中的基因组DNA。本专利技术提取芝麻叶片基因组DNA的方法优选包括：将芝麻叶片破碎后，用本专利技术上述DNA提取液进行提取，离心得到上清液；所述上清液与异丙醇混本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA提取液，其特征在于，包括以下浓度的组分：1.2～1.8mol·L

【技术特征摘要】
1.一种DNA提取液，其特征在于，包括以下浓度的组分：1.2～1.8mol·L-1的氯化锂，20～40mmol·L-1的EDTA，2～6g·L-1的PVP-4000。


2.根据权利要求1所述的DNA提取液，其特征在于，包括以下浓度的组分：1.6mol·L-1的氯化锂，30mmol·L-1的EDTA，3g·L-1的PVP-4000。


3.一种提取芝麻叶片基因组DNA的方法，其特征在于，用权利要求1或2所述DNA提取液提取芝麻叶片中的基因组DNA。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括：
将芝麻叶片破碎后，用权利要求1或2所述DNA提取液进行提取，离心得到上清液；
所述上清液与异丙醇混合，离心，得到的沉淀即为芝麻叶片基因组DNA。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴自明，严圭，方圣，华之梦，王敏，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西;36