增强对艾美球虫的免疫应答或限制艾美球虫感染的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及增强对艾美球虫的免疫应答或限制艾美球虫感染的组合物和方法。具体地，本发明专利技术提供疫苗载体和使用疫苗载体来增强对顶复门寄生虫的免疫应答以及降低与继发感染相关的发病率或死亡率的方法。所述疫苗载体包括编码菱状体多肽的多核苷酸，以及任选地包括适合表达在疫苗载体表面的免疫刺激性多肽。

【技术实现步骤摘要】
增强对艾美球虫的免疫应答或限制艾美球虫感染的组合物和方法本申请是申请号为201480021011.6，申请日为2014年2月14日，专利技术名称为“增强对艾美球虫的免疫应答或限制艾美球虫感染的组合物和方法”的中国专利申请的分案申请。相关申请的交叉参考本专利申请要求2013年2月14日提交的美国临时专利申请号61/764,681的优先权权益，该临时专利申请的全部内容在此通过引用并入此处。序列表本申请是通过EFS-Web电子提交的，并且包含电子提交的txt格式的序列表。该txt文件包含题目为“2014-02-13_5658-00201_ST25.txt”的序列表，其创建于2014年2月13日，大小是40.3千字节。这个txt文件中包含的序列表是说明书的一部分，因此通过引用其全部并入此处。
球虫病(coccidiosis)是由顶复门(apicomplexan)原生动物寄生虫(艾美球虫属(Eimeriaspp.)和相关寄生虫)引起的禽、猪和牲畜的传染性疾病，是世界范围的难题。由于球虫病对禽业估计高达每年二十亿美元生产损失的经济影响，球虫病是禽的前十大传染性疾病。其它顶复门寄生虫也引起疾病，包括疟原虫(Plasmodium)、隐孢子虫(Cryptosporidium)和弓形虫(Toxoplasma)，其分别是疟疾、隐孢子虫病和弓形虫病的病原体。
技术介绍
球虫病的典型症状包括食欲的迅速丧失、体重减轻、腹泻和急剧的死亡率。当群体暴露于高水平病原体时以及在大多数情况下易感染球虫病的鸟暴露于继发性细菌感染时，在群体中爆发球虫病。传统的疾病控制方法包括施用抗生素和化学治疗试剂。然而，随着持续使用，这引发耐药性问题。使用抗生素也降低社会对禽肉的接受度。因为接种疫苗能够赋予长期保护(通常是商用鸡的整个生命周期)，所以接种疫苗是合理的方法。针对艾美球虫的大多数商业上可获得的疫苗，基于控制的低剂量的基本上完全毒力的但对药物敏感的艾美球虫寄生虫。使用目前基于艾美球虫的疫苗进行接种疫苗，在接种的群体中产生大量疫苗反应发病率和经济损失。因此，需要针对艾美球虫的有效的低毒力疫苗。基于保守的免疫原性靶标的针对艾美球虫的有效疫苗，也可能被证明可用作针对其它顶复门寄生虫的疫苗。
技术实现思路
此处提供一种包含编码顶复门菱状体(ApicomplexanRhomboid)多肽的第一多核苷酸序列的疫苗载体，及其使用方法。在一方面，公开了一种疫苗载体，其含有编码顶复门菱状体多肽或其免疫原性片段的第一多核苷酸和编码免疫刺激性多肽的第二多肽序列。合适地，顶复门菱状体多肽和免疫刺激性多肽表达在疫苗载体的表面。顶复门菱状体多肽可包含SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:1-4、37-38的至少一个的免疫原性片段，或SEQIDNO:1-4和37-38的组合。免疫刺激性多肽可以是能够结合CD40的CD154多肽或HMGB1多肽。所述CD154多肽包含不多于50个氨基酸，以及包含CD154的氨基酸140-149或其同源物。在另一方面，疫苗载体包含第一多核苷酸，其编码SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:37、SEQIDNO:38的顶复门菱状体多肽、SEQIDNO:1-4或37-38的至少一个或SEQIDNO:1-4或37-38的组合的免疫原性片段。顶复门菱状体多肽可表达在疫苗载体的表面。根据本专利技术的疫苗载体可以是病毒、酵母、细菌或脂质体载体。药物组合物可包含此处所述的疫苗载体以及药学上可接受的载体。在另一方面，提供了通过向受试者施用此处所述的疫苗载体来增强受试者中针对顶复门寄生虫的免疫应答的方法。增强的免疫应答可以是增强的抗体应答、增强的T细胞应答或其组合。在又一方面，提供了通过向受试者施用此处所述的疫苗载体来减少受试者中与顶复门寄生虫感染相关的发病率和死亡率的方法。与对照相比，在施用疫苗载体的受试者中，疫苗载体能够减少与顶复门寄生虫继发感染相关的发病率和死亡率。附图说明图1是显示在若干顶复门寄生虫之间的MPP序列同源性的概要图。在顶复门中一致的MPP序列在氨基酸序列上是高度相似的。在一致序列中不相同的位置以X表示，其显示在图顶行并且是SEQIDNO:38。刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)序列(在一致序列之下的头四行)与来自巨型艾美球虫(Eimeriamaxima)的MPP序列SEQIDNO:2具有100％同一性。底部两个序列分别是来自犬新孢子虫(Neosporacaninum)(SEQIDNO:3)和柔嫩艾美球虫(Eimeriatenella)(SEQIDNO:4)的同源物。图2是在实施例中所述的疫苗载体构建体的概要表示。图3是柱状图，表示使用表达所述序列的所述疫苗载体接种小鸡后再使用巨型艾美球虫感染后8天的小鸡的体重(克)。通过不同的字母表示在处理组之间的显著差异(p<0.05)。图4是柱状图，表示使用表达所述序列的所述疫苗载体接种小鸡后再使用巨型艾美球虫挑战感染后29天存活的小鸡的体重(克)。通过实际的p值和星号(*)表示在处理组之间的显著差异(p<0.05)。图5是柱状图，表示使用表达所述序列的所述疫苗载体接种后，使用巨型艾美球虫挑战感染后8天，与巨型艾美球虫致命性挑战感染相关的死亡率百分比。通过星号(*)表示显著差异(p<0.05)。具体实施方式针对球虫病的传统疫苗通常是基于可控数目传代(deliver)的活的/减毒的寄生虫。然而，由于寄生虫是活的以及能够引起疾病，所以感染的风险不能消除。此外，这些类型疫苗的生产成本非常高，因为它涉及到通过活的鸟来传递寄生虫、定期收集和确保从生产到在孵化场或在农场使用的不中断的冷中转链。使用接种疫苗是关键的控制方法，使用重组疫苗可改进基于球虫病疫苗的整体效率同时降低生产成本。艾美球虫物种是高度免疫原性的、并且能够刺激强效的宿主免疫应答。这种真核生物部分的广泛抗原库(repertoire)在功能上是高度特异性的，因而适合作为重组疫苗开发的合适靶标。子孢子和裂殖子是寄生虫的最能动(motile)阶段以及负责激活和维持活性感染。这些进入肠上皮细胞的侵入阶段是寄生虫在宿主细胞内继续其生命周期的必要过程。位于寄生虫的前(顶)端的高度特化的细胞器组参与运输这些能动阶段从肠腔易位进入上皮层所需的各种蛋白。这种顶端复合物由包括大量微线体(microneme)的各种分泌细胞器组成，所述微线体将蛋白环境转运至能动的顶复门生殖子(zoite)表面以支持能动性(motility)的基本功能。在几个详细描述的微线体相关蛋白中，血小板反应相关的黏着蛋白(TRAP)已在作为候选疫苗的重组沙门氏菌属(Salmonella)和芽孢杆菌属(Bacillus)载体系统中用作成功的重组抗原。参见美国公开号2011本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗载体，其包含编码任选在疫苗载体表面表达的顶复门菱状体多肽的第一多核苷酸序列，其中所述菱状体多肽由选自SEQ ID NO:2的多肽或SEQ ID NO:2的免疫原性片段所组成，所述SEQ ID NO:2的免疫原性片段包含SEQ ID NO:2的氨基酸1-11、18-27或31-43，其中所述疫苗载体选自病毒、细菌、酵母和脂质体。/n

【技术特征摘要】
20130214 US 61/764,6811.一种疫苗载体，其包含编码任选在疫苗载体表面表达的顶复门菱状体多肽的第一多核苷酸序列，其中所述菱状体多肽由选自SEQIDNO:2的多肽或SEQIDNO:2的免疫原性片段所组成，所述SEQIDNO:2的免疫原性片段包含SEQIDNO:2的氨基酸1-11、18-27或31-43，其中所述疫苗载体选自病毒、细菌、酵母和脂质体。


2.根据权利要求1所述的疫苗载体，其还包括编码免疫刺激性多肽的第二多核苷酸序列，其中所述免疫刺激性多肽表达在疫苗载体的表面。


3.根据权利要求2所述的疫苗载体，其中所述免疫刺激性多肽包含HMGB1多肽。


4.根据权利要求3所述的疫苗载体，其中所述HMGB1多肽包含选自如下的多肽：SEQIDNO:15-23、SEQIDNO:15-23的至少一个的片段、与SEQIDNO:15-23具有至少95％序列同一性的多肽及其组合。


5.根据权利要求2-4中任一项所述的疫苗载体，其中所述免疫刺激性多肽包含能够结合CD40的CD154多肽，所述CD154多肽具有不多于50个氨基酸以及包含选自如下的多肽的氨基酸140-149：SEQIDNO:24、SEQIDNO:25及其同源物，或者
所述CD154多肽是选自如下的多肽：SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30和与SEQIDNO:26-30的至少一个具有至少90％序列同一性的多肽。


6.根据权利要求2-4中任一项所述的疫苗载体，其中所述载体包含一个拷贝以上的所述第一多核苷酸和/或一个拷贝以上的所述第二多核苷酸序列。


7.根据权利要求2-4中任一项所述的疫苗载体，其中所述第一多核苷酸序列符合同一读码框地连接至所述第二多核苷酸序列。


8.根据权利要求7所述的疫苗载体，其中所述第一多核苷酸通过间隔核苷酸序列与所述第二多核苷酸连接。


9.根据权利要求1所述的疫苗载体，其中所述疫苗载体是枯草杆菌属Bacillusspp.。


10.根据权利要求1-4中任一项所述的疫苗载体，其还包含编码TRAP多肽的第三多核苷酸。


11.根据权利要求10所述的疫苗载体，其中所述TRAP多肽选自：与SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:40、SEQIDNO:5的免疫原性片段、SEQIDNO:6的免疫原...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·R·巴尔塔，L·贝里曼，L·比耶尔克，B·哈吉斯，S·施瓦拉迈亚，O·B·福克纳，
申请(专利权)人：阿肯色大学评议会，德克萨斯AM大学体系，
类型：发明
国别省市：美国;US