胰岛素或其类似物的序列分析方法及鉴定方法技术

本发明专利技术涉及药物分析领域领域，特别涉及胰岛素或其类似物的序列分析方法及鉴定方法。本发明专利技术采用合适的二硫键还原方法，将胰岛素双链结构还原成两条单独肽链，通过液相色谱分离，高分辨串联质谱分析，采用合适的二级质谱碰撞能量，获得最为丰富的质谱碎片信息，与理论序列匹配，以获得100％的序列覆盖率，为胰岛素的质控和打假工作提供有力技术支持。

【技术实现步骤摘要】
胰岛素或其类似物的序列分析方法及鉴定方法
本专利技术涉及药物分析领域领域，特别涉及胰岛素或其类似物的序列分析方法及鉴定方法。
技术介绍
近十年来，生物技术药物在一些疾病治疗方面具有明显的优势，其中出现了一大批明星药物。不同于传统的小分子化学药物，生物技术药物一般具有分子量大、结构复杂、稳定性差、批间差异大等特点，因此其质量控制比化学药物更复杂，需要一系列涵盖不同分析领域的分析技术，才能有效地表征其理化属性。《生物技术药物研发与评价技术指导原则》(试行)明确要求，对于蛋白质和多肽类药物，候选药物的氨基酸序列原则上应与参照药相同；在药学研究与评价时，要求对于氨基酸序列测定的比对试验研究，可以与已知的参照药序列直接进行比对。传统的蛋白质序列分析方法包括N-末端分析法如二硝基氟苯法、丹磺酰氯法、Edman降解法和氨肽酶法；C-末端分析法如肼解法、还原法和羧肽酶法。这些方法操作程序复杂，工作量大。随着质谱技术的飞跃发展，具有高质量精度及宽动态范围等优点的高分辨质谱使得生物技术药物的序列分析变得更为便捷。质谱分析蛋白质序列的原理是基于肽链经过质谱仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胰岛素或其类似物的序列分析方法，其特征在于，取待测胰岛素或其类似物与酸混合，经二硫键还原试剂与蛋白变性剂还原成单链，经超高效液相色谱-高分辨串联质谱进行序列分析；/n所述二硫键还原试剂包括但不限于：三(2-羧乙基)膦或二硫苏糖醇中的一种或两者的组合；/n所述蛋白变性剂但不限于：盐酸胍或尿素中的一种或两者的组合。/n

【技术特征摘要】
1.胰岛素或其类似物的序列分析方法，其特征在于，取待测胰岛素或其类似物与酸混合，经二硫键还原试剂与蛋白变性剂还原成单链，经超高效液相色谱-高分辨串联质谱进行序列分析；
所述二硫键还原试剂包括但不限于：三(2-羧乙基)膦或二硫苏糖醇中的一种或两者的组合；
所述蛋白变性剂但不限于：盐酸胍或尿素中的一种或两者的组合。


2.如权利要求1所述的序列分析方法，其特征在于，所述酸为盐酸，盐酸的浓度为10mmol/L，用盐酸将待测胰岛素或其类似物稀释成1mg/mL。


3.如权利要求1或2所述的序列分析方法，其特征在于，所述盐酸胍浓度为6mol/L，所述尿素的浓度为8mol/L。


4.如权利要求1至3任一项所述的序列分析方法，其特征在于，所述三(2-羧乙基)膦浓度为50mmol/L，所述二硫苏糖醇的浓度为50mmol/L。


5.如权利要求1至4任一项所述的序列分析方法，其特征在于，所述还原的温度为40～45℃，时间为40min。


6.如权利要求1至5任一项所述的序列分析方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-高分辨串联质谱所用的质谱碎裂方式包括但不限于HCD和/或CID。


7.如权利要求1至6任一项所述的序列分析方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-高分辨串联质谱的分析条件如下：
液相色谱条件：C18色谱柱；柱温45℃；流动相A为含0.1％甲酸的乙腈溶液，B为含0.1％甲酸的水溶液；线性梯度洗脱：0～3min，3％A；3～4min，3％～10％A；4～9min，10％～30％A；9～15min，30％A；15～17min，30％～50％A；17.1～22min，95％A；22.1～25min，3％A；流速：0.3mL/min；进样量：2μL；
质谱条件：电喷雾离子源；正离子检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建伟，孙跃权，周奕含，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22