利用烟草双荧光素酶报告系统检测ath-miRNA170-3p靶向MSH2的方法技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体为一种利用烟草双荧光素酶报告系统检测ath‑miRNA170‑3p靶向MSH2的验证方法。烟草双荧光素酶报告系统包含荧光虫荧光素酶(F‑Luc)和海肾荧光素酶(R‑Luc)；其中，R‑Luc作为内参，且F‑Luc的3′UTR区域中嵌入限制性酶切位点AvrII和AgeI。本发明专利技术方法有助于ath‑miRNA170‑3p调控拟南芥MSH2基因表达机理的阐明及生物标记物的筛选，对于ath‑miRNA170‑3p调控拟南芥MSH2基因响应逆境胁迫的研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
利用烟草双荧光素酶报告系统检测ath-miRNA170-3p靶向MSH2的方法
本专利技术涉及生物
，具体为一种利用烟草双荧光素酶报告系统检测ath-miRNA170-3p靶向MSH2的验证方法。
技术介绍
小RNA(microRNAs，miRNAs)是一类约22个核苷酸(nt)、高度保守的内源性非编码单链小RNA。其表达具有明显的组织和时间特异性，能够互补或部分互补的与靶基因mRNA3'端非翻译区域(3'UTR)的特定序列结合，诱导靶基因mRNA被剪切或抑制其翻译，从而在转录后水平调控生物的生长、发育和对逆境的响应(Crosby等，2009；Noman等，2017；Sarver等，2009；Orangi等，2019)。成熟的miRNAs可以同时封闭多个靶基因的翻译，干预miRNAs可改变多个靶基因的表达水平，而且调控效率非常高(Orangi等，2019)。例如，人结肠直肠癌(CRC)细胞系中，miRNA-21过表达明显下调了MSH2和MSH6蛋白质的表达；然而，miR-21表达降低则明显增加了这2种蛋白质的表达(Bhandari本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶报告系统，其特征在于：烟草双荧光素酶报告系统包含荧光虫荧光素酶(F-Luc)和海肾荧光素酶(R-Luc)；其中，R-Luc作为内参(常数)，且F-Luc的3′UTR区域中嵌入限制性酶切位点AvrII和AgeI。/n

【技术特征摘要】
1.一种MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶报告系统，其特征在于：烟草双荧光素酶报告系统包含荧光虫荧光素酶(F-Luc)和海肾荧光素酶(R-Luc)；其中，R-Luc作为内参(常数)，且F-Luc的3′UTR区域中嵌入限制性酶切位点AvrII和AgeI。


2.按权利要求1所述的MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶报告系统，其特征在于：所述系统为对双荧光素酶报告(即3′UTRsensor，Addgene55206)质粒进行修饰，并于F-Luc的3′UTR区域中嵌入的限制性酶切位点AvrII和AgeI之间插入ath-miRNA170-3p的靶向基因-MSH2序列。


3.一种权利要求1所述的MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶报告系统的应用，其特征在于：所述双荧光素酶报告系统在检测ath-miRNA170-3p在调控靶向拟南芥MSH2基因中的应用。


4.按权利要求3所述的MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶报告系统的应用，其特征在于：
采用农杆菌介导的瞬时转化烟草叶片的双荧光素酶报告系统，检测植物ath-miRNA170-3p与靶基因的相互作用的应用。


5.按权利要求3所述的MSH2为ath-miRNA170-3p靶向基因的烟草双荧光素酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵强，王鹤潼，张延召，刘宛，谢甫绨，贾春云，巩宗强，台培东，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21