一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记及其应用。检测RAI14蛋白表达的产品在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。RAI14蛋白作为治疗靶点在制备食管癌转移中的应用。RAI14参与多种肿瘤过程，肿瘤基因组图谱数据库显示，RAI14在EC中表达上调，并与T分期、组织学分级及不良临床预后有关。在EC细胞系中评价RAI14的相似性。RAI14过表达可促进体外培养的细胞增殖、迁移和侵袭。RAI14基因的敲除通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞而起到相反的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记及其应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。
技术介绍
食管癌(EsophagusCancer)是恶性程度最高的恶性肿瘤之一。根据美国癌症协会(AmericanCancerSociety)的数据，2019年美国估计有17650例新病例和16080例估计死亡。它的发病可能是由于生理、社会经济学或社会人口学上的差异。对于所有阶段的EC，尽管出现了包括手术、放疗和化疗在内的多种治疗方法，但5年相对生存率约为19％。该病早期症状不明显，诊断晚、转移快导致死亡率较高。因此，有必要寻找具有诊断和治疗价值的潜在靶点，并对其分子机制进行深入研究。RAI14基因，也被称为NORPEG，是一种发育调节基因，最初来源于人视网膜色素上皮细胞系。研究表明，RAI14在人体组织中广泛表达，并参与广泛的生理和病理过程。RAI14在视网膜、胎盘、睾丸和精子中被鉴定为一种调节蛋白。此外，RAI14还参与NADPH氧化酶介导的动脉粥样硬化信号转导、天然免疫信号通路调节I型干扰素、调节细胞紧密连接、肿瘤侵袭表型和药物敏感性。最近的研究强调了RAI14与恶性肿瘤的联系，如乳腺癌、胃癌和前列腺癌。然而，据我们所知，RAI14与EC之间的关系尚不清楚。在此，本专利技术证明RAI14在EC中表达上调，并与EC的恶性行为有关。本专利技术证明RAI14沉默通过STAT3信号通路抑制EC进展，提示RAI14是EC有价值的预后标记物和治疗靶点。
技术实现思路
<br>本专利技术提供了一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。本专利技术表明RAI14调控STAT3通路，在EC进展过程中起癌基因的作用，这表明RAI14是治疗EC的一个有前景的治疗靶点。本专利技术的技术方案如下：RAI14和/或STAT3作为生物标记物在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。检测RAI14和/或STAT3的试剂在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。一种食管癌检测试剂盒，其特征在于，包括与RAI14和/或STAT3特异性结合的检测物。所述检测物选自与RAI14和/或STAT3特异性结合的抗体或者与RAI14和/或STAT3编码基因特异性结合的引物或探针。所述试剂盒优选包含检测RAI14的引物对:5'-ccagtgccacacaccg-3'和5'-ttcggctggcatttagac-3'；以及用于检测GAPDH的引物对5'-AATCCCATCATCATC-3'和5'-AGGCTTGTTCATCTC-3'。RAI14蛋白作为治疗靶点在制备食管癌转移中的应用。抑制或沉默RAI14蛋白的物质在制备食管癌转移中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种食管癌转移诊断和/或预后评估的生物标记。在本专利技术中，维甲酸诱导14(RAI14)参与多种肿瘤过程，肿瘤基因组图谱数据库显示，RAI14在EC中表达上调，并与T分期、组织学分级及不良临床预后有关。在EC细胞系中评价RAI14的相似性。RAI14过表达可促进体外培养的细胞增殖、迁移和侵袭。RAI14基因的敲除通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞而起到相反的作用。RAI14机械性激活STAT3，上调Mcl-1和cyclinD1，但抑制caspase-3裂解。抑制STAT3可恢复RAI14的致癌作用。此外，体内RAI14沉默进一步抑制了肿瘤的生长和Ki67的蛋白水平。综上所述，本专利技术表明RAI14调控STAT3通路，在EC进展过程中起癌基因的作用，这表明RAI14是治疗EC的一个有前景的治疗靶点。附图说明图1RAI14在EC中表达上调，并与临床病理特征有关A为本专利技术的在TCGA数据库中，125个食管肿瘤组织(肿瘤)中RAI14的表达较12个相邻正常食管组织(正常)上调示意图。B为本专利技术的根据RAI14的高表达和低表达分层的EC患者的Kaplan-Meier总生存曲线示意图。C本专利技术的RAI14表达与组织学分级的关系的示意图。D为本专利技术RAI14表达与T期的关系的示意图。E为本专利技术食管癌细胞系和食管上皮细胞系RAI14mRNA水平的qPCR分析示意图之一。F为本专利技术Westernblotting检测食管癌细胞株和食管上皮细胞株RAI14蛋白水平示意图之二。图2为RAI14调节的细胞系示意图。A为本专利技术RAI14在EC细胞系中被调控，转染siNC、siRAI14-1、siRAI14-2或siRAI14-3的TE-1细胞RAI14的mRNA和蛋白水平示意图。B为本专利技术转染RAI14载体或RAI14序列的TE-14细胞RAI14的mRNA和蛋白水平示意图。图3为RAI14表达对EC细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响示意图。A本专利技术用CCK8法检测转染慢病毒后细胞的存活率，转染siNC、siRAI14-1或siRAI14-2的TE-1细胞示意图之一。B为本专利技术用CCK8法检测转染慢病毒后细胞的存活率，转染RAI14载体或RAI14的TE-14细胞作用示意图之一。C为本专利技术AnnexinV-FITC/PI染色区分早期(右下象限)和晚期(右上象限)凋亡状态的细胞，活细胞呈双阴性(左下象限)示意图。D为本专利技术测定RAI14调制后细胞周期分布示意图。E为本专利技术细胞凋亡率(包括早期和晚期凋亡状态)示意图。F为本专利技术每个细胞周期阶段的细胞比例示意图。图4为RAI14表达对EC细胞迁移和侵袭的影响示意图。A为本专利技术测定了RAI14基因敲除后TE-1细胞的迁移能力示意图。B为本专利技术测定了RAI14过度表达后TE-14细胞的迁移能力示意图。C为本专利技术测定RAI14基因敲除后TE-1细胞的侵袭能力示意图。D为本专利技术检测RAI14过度表达后TE-14细胞的侵袭能力示意图。图5为RAI14调控STAT3通路及其下游因子示意图。A为本专利技术GSEA图显示RAI14水平与STAT3激活的基因特征(DAUER_STAT3_-UP)呈正相关示意图。B为本专利技术RAI14调控细胞RAI14、p-STAT3、总STAT3、Mcl-1、细胞周期蛋白D1和裂解caspase-3的Westernblot分析示意图。图6为RAI14通过激活STAT3促进EC的进展示意图。A为本专利技术westernblotting检测RAI14、p-STAT3、总STAT3、Mcl-1、细胞周期蛋白D1和裂解caspase-3的蛋白表达示意图。B为本专利技术CCK-8法检测细胞增殖情况示意图。C为本专利技术细胞凋亡的流式细胞术散点图示意图。D为本专利技术流式细胞术评估细胞周期分布的流程图示意图。E为本专利技术将凋亡率作示意图。F为本专利技术每个细胞周期阶段的细胞比例示意图。图7为RAI14沉默抑制体内肿瘤生长示意图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.RAI14和/或STAT3作为生物标记物在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.RAI14和/或STAT3作为生物标记物在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。


2.检测RAI14和/或STAT3的试剂在制备食管癌转移诊断和/或预后评估试剂、试剂盒或检测装置中的应用。


3.一种食管癌检测试剂盒，其特征在于，包括与RAI14和/或STAT3特异性结合的检测物。


4.如权利要求3所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述检测物选自与RAI14和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪建林，王坚，朱宏明，于静萍，
申请(专利权)人：常州市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32