【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】浮力激活细胞分选(BACS)兼容的激活/转导系统和方法交叉引用本专利技术享有2018年3月14日提交的申请号为No.62/643081的美国临时专利申请的优先权，其以全部引用的方式包含于本文中。
技术介绍
人类淋巴细胞的基因修饰在治疗性活细胞疗法(如嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞)的开发和制造中是一个日益重要的步骤。CAR-T细胞，比如FDA批准的首个用于治疗急性淋巴细胞白血病的KYMRIAH(Tisagenlecleucel)，是患者自己的(自体的)T淋巴细胞经过复杂、昂贵和费时的实验室过程后制备成的可杀死癌症的细胞。如今，CAR-T细胞的制造过程通常包括以下连续步骤：(1)对患者血液实施白细胞去除术，以浓缩大量自体白细胞，然后将“白细胞分离产品(leukapheresisproduct)”从门诊运输到制造实验室；(ii)对白细胞分离产品进行初步细胞分级，以制备更接近纯的单核细胞悬浮液(MCs)，即具有更少量污染的非单核细胞(通常通过使用FicollTM或类似的可溶性聚合物作为密度剂的密度梯度离心来实现)，产生所谓的外周血单核...
【技术保护点】
1.一种方法，包括在密闭容器中使包含靶细胞与包含脂质壳气核微泡的微泡试剂的宿主液体，以及一种或多种结合到靶细胞上的细胞表面分子的抗体或其他配体进行接触，其中所述一种或多种抗体或其他配体结合到靶细胞或微泡上，其中所述接触发生的时间和条件足以使靶细胞通过所述一种或多种抗体或其他配体与微泡连接；和/n激活靶细胞以生成活化的靶细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180314 US 62/643,0811.一种方法，包括在密闭容器中使包含靶细胞与包含脂质壳气核微泡的微泡试剂的宿主液体，以及一种或多种结合到靶细胞上的细胞表面分子的抗体或其他配体进行接触，其中所述一种或多种抗体或其他配体结合到靶细胞或微泡上，其中所述接触发生的时间和条件足以使靶细胞通过所述一种或多种抗体或其他配体与微泡连接；和
激活靶细胞以生成活化的靶细胞。
2.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在密闭容器中浓缩与微泡相连的靶细胞。
3.如权利要求1或2所述的方法，所述方法进一步包括在产生与微泡相连的靶细胞后，使微泡塌陷和/或破裂。
4.如权利要求3所述的方法，在密闭容器中浓缩与微泡相连的靶细胞后，发生微泡的塌陷和/或破裂。
5.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约180min内。
6.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约1min-约180min内。
7.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约2min-约60min内。
8.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约5min-约30min内。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述活化无需将靶细胞从微泡或微泡残余物中分离出来即可实现。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述接触包括在密闭容器中接触宿主液体，所述宿主液体包括(i)与一种或多种抗体或其他配体结合的靶细胞，和(ii)能够通过接头直接或间接与一种或多种抗体或其他配体结合的微泡。
11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述接触包括在密闭容器中接触宿主液体，所述宿主液体包括(i)靶细胞，和(ii)显示一种或多种抗体或其他配体的微泡试剂，所述抗体或其他配体与靶细胞上的细胞表面分子结合。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗体或其他配体包括一种或多种抗体。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括用包括转基因的载体如病毒载体转导活化的靶细胞，以生成转导的靶细胞，其中所述转导包括在适于转导活化的靶细胞的条件下，将活化的靶细胞与包括转基因载体的基因转导试剂接触。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述转导在密闭容器中进行。
15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述转导包括将活化的CD3+靶细胞与基因工程病毒载体接触，所述载体包括编码嵌合(两部分)跨膜融合蛋白的人工基因构建体，所述融合蛋白包括细胞外抗CD19单链抗体片段和细胞内T细胞信号传导蛋白(CD3-ζ)和共刺激(4-1BB)结构域(所谓的嵌合抗原受体，或CAR)，并且其中所得的转导靶细胞是CAR-T细胞。
16.如权利要求13-15中任一项所述的方法，其中所述开始接触的时间点和通过将活化的CD3+靶细胞与基因工程病毒载体接触而开始转导的时间点之间的时间间隔为约12h-约36h。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括扩增活化的靶细胞或转导的靶细胞，其中扩增包括在适于促进活化的靶细胞或转导的靶细胞增殖的条件下培养活化的靶细胞或转导的靶细胞。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述扩增在密闭容器中进行。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述靶细胞包括CD3+T细胞，并且其中一种或多种抗体包括抗CD3和抗CD28抗体。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述宿主液体包括血液、白细胞分离产品，或其稀释液或加工处理液。
21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述宿主液体包括外周血单核细胞(PBMC)制剂。
22.如权利要求17-21中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括获得扩增的活化靶细胞或转导的靶细胞，以生成获得的活化细胞群体或获得的转导细胞群体；其中所述获得过程任选在密闭容器中进行。
23.如权利要求22所述的方法，所述方法进一步包括洗涤获得的活化细胞群或获得的转导细胞群；其中所述洗涤任选在封闭的容器中进行。
24.如权利要求22或23所述的方法，所述方法进一步包括将获得的活化细胞群或获得的转导细胞群转移到适于输注的培养基中，或转移到冷冻保存培养基中；其中所述转移任选在密闭容器中进行。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中在活化步骤之前，宿主液体中的非靶细胞被部分耗尽。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述功能性密闭容器包括：
(a)套筒，包括
(i)包括至少一个输入口、第一出口和第二出口的处理容器；
(ii)包括输入口的第二容器；
(iii)包括输入口和第一出口的第三容器；
(iv)连接处理容器的第一出口和第二容器的输入口的第一导管，其中第一导管包括第一可逆关闭装置，其中第二容器与处理容器瞬时流体地连接，使得当第一可逆关闭装置打开时，流体仅从处理容器流向第二容器；
(v)连接处理容器的第二出口和第三容器的输入口的第二导管，其中第二导管包括第二可逆关闭装置，其中第三容器与处理容器瞬时流体地连接，使得当第二可逆关闭装置打开时，流体仅从处理容器流向第三容器；
(b)包括至少一个端口的转移容器；
(c)至少第三导管，其
(i)将第三容器的第一出口连接至转移容器的至少一个端口，和
(ii)将转移容器的至少一个端口连接至处理容器的至少一个输入口；
其中所述至少第三导管包括至少第三可逆...
【专利技术属性】
技术研发人员：飞利浦·H·科埃略，威廉姆·布撒，乔纳森·埃利斯，达利普·赛西，
申请(专利权)人：热动力医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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