成纤维细胞生长因子类似物及其应用制造技术

本文公开了人FGF的肽类似物。所述肽类似物用于人体时展现出了更高的治疗活性和较少的副作用。还公开了包含FGF类似物和药学上或化妆品上可接受的载体或赋形剂的药物或化妆品组合物。还提供了治疗或预防受试者所患疾病的方法，包括给受试者施用本发明专利技术所公开的FGF类似物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】成纤维细胞生长因子类似物及其应用相关应用的交叉引用本申请要求2018年2月13日提交的美国临时申请第62/629,722号的权益，其全部内容通过引用的方式包含于此。序列表本申请包含2019年2月9日创建的以ASCII.txt文件形式提交的，标题为“222110-2730_ST25”的序列表。序列表的全部内容包含于此。
技术介绍
虽然生长因子被广泛用于治疗高剂量的化学毒性，但是其对患有放射性毒性的患者仅提供了很小的益处。诸如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)之类的药物在缓解血糖生成指数方面相对失败的主要原因是由于受辐射影响的不同组织的数量没有被这种骨髓特异性生长因子所覆盖。对小鼠FGF多能生长因子肽类似物FGF-P的研究，可以极大地影响对哪些非造血系统疾病可以受益于生长因子的理解。例如，FGF-P目前正在临床前使用。在这些研究中，FGF-P预处理改善了糖尿病动物胰腺移植后胰腺β细胞的存活和增殖。FGF-P也在开发中，作为补足防晒保护的“晒后”护理液的添加剂。此外，FGF类似物还可用于改善人体中多种创伤类型(例如烧伤、皮肤移植、缺血性溃疡和皮肤移植供体部位)的愈合，用于治疗人类牙龈炎，以及用于缺血性疾病的心肌干细胞移植。FGF-P是为小鼠而非人类优化的，因此，FGF-P在小鼠中的剂量和益处可能与在人类中观察到的不同。因此，人类FGF的FGF类似物值得期待。
技术实现思路
本文公开了人FGF的FGF肽类似物。与FGF-P(一种小鼠FGF肽类似物)相比，人FGF的类似物在用于人体时表现出了更高的治疗活性和较少的副作用。人FGF的FGF类似物及其变体在下文中被称为“FGF-PT”或“FGFPT”。在某些实施方式中，FGF-PTs包含或由SEQIDNO:2的核心序列或SEQIDNO:2的变体组成，所述变体具有在核心序列中一个或多个取代。除核心序列中的一个或多个取代之外，FGF-PTs也可以与一个或多个基团共轭。来自核心序列的一个或多个氨基酸或核心序列的取代基可以与一个或多个基团共轭。本文还公开了包含FGF-PT和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物或包含FGF-PT和化妆品上可接受的载体或赋形剂的化妆品组合物。还提供了通过给受试者施用包含FGF-PT的组合物来治疗或预防受试者所患疾病的方法。还提供了改善治疗(例如放疗或化疗)的副作用的方法。本专利技术的一个或多个实施方式的细节在随附的附图中和下面的描述中进行阐述。本专利技术的其他特征、目的和优点将从说明书、附图和权利要求中的描述中变得更为清楚。附图说明图1A-1B示出了在18Gy(戈瑞)照射后，不同剂量下的FGF-P和FGF-PT的存活率提高和体重恢复的情况。FGF-P浓度为5-20mg/kg时，从图中可以观察到小鼠存活率有所提高。图1A：存活率；图1B：体重。图2A-2B示出了在19.5Gy照射后，不同剂量下的FGF-P和FGF-PT的存活率提高和体重恢复的情况。在所有FGF-P、FGF-PT和FGF2剂量下均观察到了存活率的提高。在严重的体重减轻后观察到了体重恢复的迹象。图2A：存活率；图2B：体重。图3A-3B示出了在20.5Gy照射后，不同剂量下的FGF-P和FGF-PT的存活率提高和体重恢复的情况。在多个FGF-P、FGF-PT和FGF2剂量下观察到了存活率的提高，特别的，在非常严重的体重减轻后，在5-20mg/kg剂量下的FGF-P组小鼠体重得到了恢复。图4示出了8-9周龄的接受了18Gy的非全身照射(sub-TBI)(保护一条后腿不受辐射场的影响)的NIH瑞士雄性小鼠的以下存活率(％)：其在皮下注射10mg/kg和20mg/kg剂量的FGF-PT，在照射后24小时起连续三天每天给药一次；在照射后24小时的时间节点以0.3mg/kg的剂量皮下给药rhFGF2一次；或者载体对照组(生理盐水)在照射后24小时起连续三天每天给药一次。图5示出了8-9周龄的接受了19Gy的非全身照射(sub-TBI)(保护一条后腿不受辐射场的影响)的NIH瑞士雄性小鼠的以下存活率(％)：其在皮下注射10mg/kg和20mg/kg剂量的FGF-PT，在照射后24小时起连续三天每天给药一次；在照射后24小时的时间节点以0.3mg/kg的剂量皮下给药rhFGF2一次；或者载体对照组(生理盐水)在照射后24小时起连续三天每天给药一次。图6示出了表面等离子体共振方法。图7A-7C是hrFGF2与FGFR-2αIIIc(图7A)、FGFR-1αIIIc(图7B)和FGFR-1αIIIb(图7C)受体的拟合动力学结合图。图中显示了五个动力学运行，每个FGF-PT的浓度分别为9.50、39.0和156nM。图8A-8C是FGF-PT与FGFR-2αIIIc(图8A)、FGFR-1αIIIc(图8B)和FGFR-1αIIIb(图8C)受体的动力学结合图。图中显示了五个动力学运行，每个FGF-PT的浓度分别为1.35、2.70、5.40、10.8和21.6μM。序列的简要说明SEQIDNO:1：小鼠FGF2保守活性位点的序列(YRSRKYSSWYVALKR)。SEQIDNO:2：人FGF2保守活性位点的序列(YRSRKYTSWYVALKR)。SEQIDNO:3：小鼠FGF2的FGF类似物的序列(CYRSRKYSSWYVALKRC)。SEQIDNO:4：人类FGF2的FGF类似物的序列(CYRSRKYTSWYVALKRC)。SEQIDNO:5：是SEQIDNO:2具有多种取代的序列。具体实施方式如本文所用，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该(the)”意在也包括其复数形式，除非上下文另有清楚地指示。进一步的，在某种程度上，在具体实施方式和/或权利要求中使用了术语“包括(including)”、“包含(includes)”、“含有(having)”、“有着(has)”、“具有(with)”及其变式，这些术语旨在以类似于术语“包括”的方式表示包括含义。短语“基本上由”或“基本上包括”表示权利要求包括包含特定材料或步骤的实施例，以及那些实质上不影响权利要求的基本特性和新颖性的实施例。术语“大约(about)”表示该特定值在本领域普通技术人员测定的可接受的误差范围内，其将部分取决于如何测量或测定该值，即测量系统的限制。在本申请和权利要求中描述了特定值的情况下，除非另有说明，否则应当假设术语“大约”意味着在特定值的可接受误差范围内。在上下文中使用术语“大约”进行修饰的数字参数中，该参数可以在所述值范围0-10％的范围内变化(X±10％)。在本专利技术的公开中，范围以简写方式陈述，以避免必须详细列出并描述范围内的每个值。在适当的情况下，可以选择范围内任何适当的值作为范围的上限值、下限值或端点。例如，0.1-1.0的范围表示0.1和1.0的端点值，以及0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有SEQ ID NO:2序列的肽，条件是：a)SEQ ID NO:2的一个、两个或三个氨基酸被取代；b)在SEQ ID NO:2的C端和/或N端添加氨基酸；或者c)SEQ ID NO:2的一个、两个或三个氨基酸被取代，并且在SEQ ID NO:2的C端和/或N端添加氨基酸。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180213 US 62/629,7221.一种具有SEQIDNO:2序列的肽，条件是：a)SEQIDNO:2的一个、两个或三个氨基酸被取代；b)在SEQIDNO:2的C端和/或N端添加氨基酸；或者c)SEQIDNO:2的一个、两个或三个氨基酸被取代，并且在SEQIDNO:2的C端和/或N端添加氨基酸。


2.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X1被右旋酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸、4-碘苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸、4-胍基苯丙氨酸、4-氨甲基苯丙氨酸、4-膦酰基甲基苯丙氨酸、3，4-二氯苯丙氨酸、3，4-二氟苯丙氨酸、3，4-二羟基苯丙氨酸、4-苯甲酰苯丙氨酸、4-双(2-氯乙基)氨基苯丙氨酸、3-硝基酪氨酸、3-氯酪氨酸、3-氨基酪氨酸、3-氟酪氨酸或2，6-二甲基酪氨酸所取代。


3.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X2被右旋精氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、单甲基赖氨酸、二甲基赖氨酸、三甲基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、5-硫酸羟基赖氨酸、5-硝酸羟基赖氨酸、5-磷酸羟基赖氨酸、单甲基精氨酸、不对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸、乙酰基赖氨酸、三氟乙酰赖氨酸、棕榈酰赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸所取代。


4.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X3被右旋丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、2-氨基-4-羟基丁酸(高丝氨酸)、O-苄基高丝氨酸、O-甲基高丝氨酸、3-氨基-2-羟基丙酸、O-磷酸丝氨酸、O-磺基丝氨酸、O-硝基丝氨酸、β-(2-噻吩基)丝氨酸、O-磷酸苏氨酸、O-磺基苏氨酸、O-硝基苏氨酸所取代。


5.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X4被右旋精氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、单甲基赖氨酸、二甲基赖氨酸、三甲基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、5-硫酸羟基赖氨酸、5-硝酸羟基赖氨酸、5-磷酸羟基赖氨酸、单甲基精氨酸、不对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸、乙酰赖氨酸、三氟乙酰赖氨酸、棕榈酰赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸所取代。


6.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X5被精氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、单甲基赖氨酸、二甲基赖氨酸、三甲基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、5-硫酸羟基赖氨酸、5-硝酸羟基赖氨酸、5-磷酸羟基赖氨酸、单甲基精氨酸、不对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸、乙酰赖氨酸、三氟乙酰赖氨酸、棕榈酰赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸取代。


7.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X6被右旋酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸、4-碘苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸、4-胍基苯丙氨酸、4-氨基甲基苯丙氨酸、4-膦酰基甲基苯丙氨酸、3，4-二氯苯丙氨酸、3，4-二氟苯丙氨酸、3，4-二羟基苯丙氨酸、4-苯甲酰苯丙氨酸、4-双(2-氯乙基)氨基苯丙氨酸、3-硝基酪氨酸、3-氯酪氨酸、3-氨基酪氨酸、3-氟酪氨酸或2，6-二甲基酪氨酸所取代。


8.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X7被右旋苏氨酸、丝氨酸、β-羟基正缬氨酸或O-磷酸苏氨酸所取代。


9.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X8被右旋丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、2-氨基-4-羟基丁酸(高丝氨酸)、O-苄基高丝氨酸、O-甲基高丝氨酸、3-氨基-2-羟基丙酸、O-磷酸丝氨酸、O-磺基丝氨酸、O-硝基丝氨酸、β-(2-噻吩基)丝氨酸、O-磷酸苏氨酸、O-磺基苏氨酸、O-硝基苏氨酸所取代。


10.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X9被右旋色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、1-甲基色氨酸、5-氟色氨酸、4-甲基色氨酸、6-氟色氨酸、7-氮杂色氨酸、5-苄氧基色氨酸、5-溴色氨酸、5-氯色氨酸、5-羟基色氨酸、5-甲氧基色氨酸、6-氯色氨酸、6-甲基色氨酸、7-甲基色氨酸或7-氮杂色氨酸所取代。


11.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X10被右旋酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸、4-碘苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、4-三氟甲基苯丙氨酸、4-胍基苯丙氨酸、4-氨基甲基苯丙氨酸、4-膦酰基甲基苯丙氨酸、3，4-二氯苯丙氨酸、3，4-二氟苯丙氨酸、3，4-二羟基苯丙氨酸、4-苯甲酰苯丙氨酸、4-双(2-氯乙基)氨基苯丙氨酸、3-硝基酪氨酸、3-氯酪氨酸、3-氨基酪氨酸、3-氟酪氨酸或2，6-二甲基酪氨酸所取代。


12.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X11被右旋缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、β-环己基丙氨酸、α,β-二氨基丙酸、炔丙基甘氨酸、α-氨基异丁酸、β-2-吡啶基)丙氨酸、β-3-吡啶基)丙氨酸、β-环丙基丙氨酸、β-叔丁基丙氨酸、β-烯丙氧基羰基-α,β-二氨基丙酸、4-氟代苯基甘氨酸、5，5，5-三氟亮氨酸、2-氨基-3-(二甲氨基)-丙酸或2-氨基己酸、烯丙基甘氨酸所取代。


13.根据权利要求1所述的肽，其中SEQIDNO:2的X12被右旋丙氨酸、丝氨酸、β-环己基丙氨酸、α,β二氨基丙酸、炔丙基甘氨酸、α-氨基异丁酸、β-(2-吡啶基)丙氨酸、β-(3-吡啶基)丙氨酸、β-(环丙基)丙氨酸、β-(叔丁基)丙氨酸、β-烯丙氧基羰基-α,β-二氨基丙酸、4-氟代苯基甘氨酸、5，5，5-三氟亮氨酸、2-氨基-3-(二甲氨基)-丙酸或2-氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·格森·奥库尼夫，史蒂文·G·斯瓦茨，张震寰，史蒂文·炳荣·张，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US