肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途制造技术

本发明专利技术提供一种肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。本发明专利技术首次发现了肠道菌群在子痫前期疾病中的水平变化，通过检测菌群的变化，可以实现子痫前期的早期诊断，使用本发明专利技术的微生物标志物进行诊断，特异性高、敏感性强。检测对象采集处理简易、无侵害性、成本低；模型应用广泛，其应用对象不仅适用于大规模人群筛选，也可针对个体实现最终监测。

Application of intestinal microbiota as a biomarker of preeclampsia

The invention provides a combined use of intestinal microorganisms for the preparation or screening of preeclampsia detection products. The intestinal microorganisms are selected from one or more of Fusobacterium, veroniella, Clostridium, trichospirillum and Lactococcus. The invention for the first time discovers the level change of intestinal flora in preeclampsia disease, and early diagnosis of preeclampsia can be realized by detecting the change of intestinal flora. The microbial markers of the invention are used for diagnosis, with high specificity and strong sensitivity. The detection object collection and processing is simple, non-invasive and low-cost; the model is widely used, and its application object is not only suitable for large-scale crowd screening, but also for individual to achieve final monitoring.

【技术实现步骤摘要】
肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途
本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途。
技术介绍
子痫前期(Preeclampsia,PE)是以妊娠20周后出现血压升高和蛋白尿，同时伴随心血管功能、凝血功能、肝功能、肾功能等多脏器功能受损为特征的一组妊娠特异性症候群。PE的发生率为3-10％，全球每年约有850万新发病例，且近年来有增高趋势，是导致孕产妇、围产儿死亡的首要原因。因子痫前期和子痫死亡者约占孕产妇死亡的15％，其中有2/3与子痫前期有关。因此，对于子痫前期仍需要足够重视。目前，PE的发病机制尚不明确。其发病被认为与多种因素相关，包括免疫功能、环境因素、遗传因素、营养状况、致病微生物及精神因素等。但缺乏有效的预防措施，常在妊娠中、晚期出现相应的临床症状后采取对症治疗，引起孕产妇及新生儿预后不良。早期识别PE高危人群并采取相应预防、干预措施，有助于降低PE发病率，改善母婴结局。目前的筛查方案包括PE高危因素评估、胎盘生长因子和可溶性血管内皮生长因子等生物标志分子，因其特异性和敏感性有限，限制了其临床应用的实施和普及。国际妊娠期高血压研究学会在2018年5月24日的指南中提出，迄今为止，在妊娠第一、二阶段，没有能够可靠预测子痫前期的方法。好的诊断方法应考察不同参数以优化方法，使其自身具备高敏感性、高特异性，同时在临床应用上应满足高通量、易操作、无侵害性和低成本等要求。因此建立简便、经济，且具有较高敏感性和特异性的综合筛查方案，当属产科临床的最关键环节之一。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。本专利技术第二方面提供肠道微生物的特异性识别试剂联合用于制备子痫前期检测试剂盒的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。本专利技术第三方面提供一种子痫前期检测试剂盒，包括肠道微生物的特异性识别试剂，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。本专利技术第四方面提供一种子痫前期检测芯片，所述芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性识别具核梭杆菌属、韦荣氏菌属和乳球菌属的基因序列。本专利技术第五方面提供前述子痫前期检测试剂盒在子痫前期筛查、诊断或辅助诊断中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：1)提供受试者的粪便样本；2)对所述粪便样本进行粪便细菌基因组DNA进行抽提；3)采用肠道微生物的特异性识别试剂进行PCR扩增并测序获得测序数据；4)对所述测序数据进行OUT聚类分析；5)对步骤5中得到的OTU采用随机森林算法进行分析；6)预测所述受试者是否为子痫前期。如上所述，本专利技术的肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途，具有以下有益效果：本专利技术首次发现了肠道菌群在子痫前期疾病中的水平变化，通过检测菌群的变化，可以实现子痫前期的早期诊断，使用本专利技术的微生物标志物进行诊断，特异性高、敏感性强。检测对象采集处理简易、无侵害性、成本低；模型应用广泛，其应用对象不仅适用于大规模人群筛选，也可针对个体实现最终监测。附图说明图1是子痫前期患者同健康孕妇机器学习随机森林模型的构建图，A～C依次是通过随机森林筛选出的差异菌属对模型的贡献度，诊断模型的ROC曲线图和验证模型的曲线图。图2是子痫前期患者与健康孕妇的LEfse结果图；图3是目标菌属在子痫前期患者中的ROC曲线图，图A～I依次是Clostridium、Fusobacterium、Lachnospira、Lactococcus、Veillonella、Fusobacterium+Lactococcus、Fusobacterium+Veillonella、Lactococcus+Veillonella、Lactococcus+Veillonella+Fusobacterium在子痫前期患者中的ROC曲线图。具体实施方式本专利技术提供肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属(Fusobacterium)、韦荣氏菌属(Veillonella)、梭菌属(Clostridium)、毛螺旋菌属(Lachnospira)和乳球菌属(Lactococcus)中的一种或多种。其中，毛螺旋菌属和乳球菌属在患者粪便中水平降低，具核梭杆菌属、韦荣氏菌属和梭菌属在患者中水平增加。进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。在一种实施方式中，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性的引物是能够检测所述肠道微生物的包括16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列的引物。本专利技术提供的肠道微生物的特异性识别试剂联合用于制备子痫前期检测试剂盒的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。在一种实施方式中，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性的引物是能够检测所述肠道微生物的包括16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列的引物。所述试剂盒可以包含测试管或其他合适的容器、反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶等酶、SYBRGreen荧光染料、DEPC-水等。本专利技术提供的一种子痫前期检测试剂盒，包括肠道微生物的特异性识别试剂，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
1.肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。


4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。


5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。


6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。


7.肠道微生物的特异性识别试剂联合用于制备子痫前期检测试剂盒的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛...

【专利技术属性】
技术研发人员：周宏伟，黄莉萍，陈夏，李攀，
申请(专利权)人：南方医科大学珠江医院，
类型：发明
国别省市：广东;44