一种有效的免疫印迹的PVDF膜标记方法、一抗孵育方法及洗脱、显色方法技术

本发明专利技术公开了一种有效的免疫印迹PVDF膜的标记方法和一抗孵育方法，属于蛋白免疫印迹检测领域。本发明专利技术的免疫印迹PVDF膜的标记方法，是用无墨中性笔隔着不透水薄膜对PVDF膜进行标记。本发明专利技术的一抗孵育方法，是在将PVDF膜和一抗溶液共同置于BD管中，再将BD管置于Crystal试管旋转混匀器，保持试管旋转12‑16h，期间的环境温度为4℃。本发明专利技术的洗脱、显色方法，是保持PVDF膜的样品面朝上，进行洗脱、显色。本发明专利技术的方法均十分利于提高蛋白免疫印迹的检测能力和结果的可读性。

An effective immunoblotting method for PVDF membrane labeling, first antibody incubation, elution and color development

【技术实现步骤摘要】
一种有效的免疫印迹的PVDF膜标记方法、一抗孵育方法及洗脱、显色方法
本专利技术属于蛋白免疫印迹检测领域。
技术介绍
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Westernblotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法，主要包括如下步骤：1)蛋白样品凝胶电泳；2)转膜：通过电流将凝胶内的蛋白转移到聚偏二氟乙烯(PolyvinylideneFluoride，PVDF)膜上；3)洗脱：洗去未结合的蛋白；4)封闭：将未结合蛋白的PVDF膜位点结合封闭剂(例如牛乳蛋白)，阻止后续步骤一抗非特异性结合PVDF膜；5)洗脱：洗去未结合封闭剂；6)一抗孵育：将目标蛋白特异性抗体(即一抗)结合到膜上的蛋白；7)洗脱：洗去未结合一抗；8)二抗孵育：将靶向前述一抗的抗体(即二抗)结合到一抗上，二抗上结合有化学发光或酶标记物；9)洗脱：洗去未结合二抗；10)显色：加入发光底物，与二抗上的标记物反应，产生光学信号。在免疫印迹实验中，特别是需要同时进行多个目的蛋白检测时，一般需要在转膜前和/或转膜后对PVDF膜进行标本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PVDF膜的标记方法，其特征在于：它是手持无墨中性笔隔着不透水薄膜对PVDF膜进行书写标记。/n

【技术特征摘要】
1.一种PVDF膜的标记方法，其特征在于：它是手持无墨中性笔隔着不透水薄膜对PVDF膜进行书写标记。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述不透水薄膜是PE薄膜。


3.一种一抗孵育方法，其特征在于：它是在将PVDF膜和一抗溶液共同置于BD管中，再将BD管置于Crystal试管旋转混匀器，保持试管旋转12-16h，期间的环境温度为4℃。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述环境温度为4℃孵育12-16h。


5.一种免疫印迹的洗脱方法，其特征在于：该方法包括：保持PVDF膜的样品面朝上，浸泡于TBS/TBST缓冲液中，摇床摇晃洗脱。


6.一种免疫印迹的显色方法，其特征在于：该方法包括：PVDF膜经显色液孵育后，保持PVDF膜的样品面朝上，进行显色曝光。


7.一种免疫印迹方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51