【技术实现步骤摘要】
一种检测副流感病毒多重real-timePCR试剂盒、方法和应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种检测副流感病毒多重real-timePCR试剂盒、方法和应用。
技术介绍
目前临床对呼吸道病原体的诊断主要依赖传统的分离培养法，培养法虽然是临床病原诊断的金标准，但是仍存在一定的局限性，包括：(1)大量病原体培养难度高或无法进行体外培养：如病毒、厌氧菌、苛养菌等；(2)阳性率低，假阴性率高(经常高达50％以上)；(3)检测耗时长：常规检测需要1-4天，某些慢生长型病原体需要3-4周才能获得培养结果；(4)操作繁琐：对操作者要求高，结果重复性不佳。除了传统的分离培养法，目前市场上针对呼吸道病原体的检测方案多以核酸检测为目的，这些检测方案依赖不同的技术原理。例如：(1)梅里埃的FilmArrayRPpanel，通过巢式PCR扩增样本的核酸，产物进行溶解曲线分析，根据不同产物的溶解峰(Tm值)不同从而鉴定病原；(2)海尔施的多重检测试剂盒，先对样本核酸进行多重PCR扩增，然后扩增产物通过毛细管电泳分析，根据产物片段...
【技术保护点】
1.一种检测副流感病毒多重real-time PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型和副流感病毒4型的试剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种检测副流感病毒多重real-timePCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型和副流感病毒4型的试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于检测副流感病毒1型的探针和特异性扩增副流感病毒1型靶标基因的引物对、用于检测副流感病毒2型的探针和特异性扩增副流感病毒2型靶标基因的引物对、用于检测副流感病毒3型的探针和特异性扩增副流感病毒3型靶标基因的引物对、用于检测副流感病毒4型的探针和特异性扩增副流感病毒4型靶标基因的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测副流感病毒1型的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述特异性扩增副流感病毒1型靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示；
所述检测副流感病毒2型的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述特异性扩增副流感病毒2型靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；
所述检测副流感病毒3型的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示，所述特异性扩增副流感病毒3型靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:8和SEQIDNO:9所示；
所述检测副流感病毒4型的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示，所述特异性扩增副流感病毒4型靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应缓冲液、酶混合物、阳性对照和阴性对照。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包含MgCl2、dNTPsMixture，所述酶混合物包含AMV逆转录酶、RNA酶抑制剂、TaqDNA聚合酶，所述阳性对照为含目的基因的质粒混合物，所述阴性对照为无核酸酶水。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述副流感病毒1型的检测通道为FAM，所述副流感病毒2型的检测通道为VIC，所述副流感病毒3型的检测通道为TexasRed，所述副流感病毒4型的检测通道为Cy5。
7.一种同时检测副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型和副流感病毒4型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将采集到的临床样本进行微生物核酸提取并纯化，得到待测样品；采用所述检测流感病毒多重real-timePCR试剂盒对待测样品进行检测，得到检测数据；以及对检测数据进行读取，得到检测结果。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：应斌武，李为民，宋兴勃，柯博文，陆小军，陈豪，吴涛，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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