一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法技术

本发明专利技术公开了一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术公开的一种LAMP检测芸薹生链格孢的方法，包括提取芸薹生链格孢基因组DNA；以基因组DNA为模板，利用引物进行LAMP扩增；LAMP产物检测：在反应结束后，直接观察反应液颜色变化；或者通过琼脂糖凝胶电泳检测。本发明专利技术公开的一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法，特异性强，灵敏度高；所用设备简单、操作简便、鉴定方便；且能实现快速、高效扩增。

【技术实现步骤摘要】
一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法
本专利技术涉及分子生物学
，更具体的说是涉及一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法。
技术介绍
芸薹生链格孢(Alternariabrassicicola)是引起结球甘蓝真菌性黑斑病的病原(以下简称黑斑病)。黑斑病在结球甘蓝整个生长期均可发生，可侵染结球甘蓝的叶、叶球、茎和角果等组织，危害结球甘蓝蔬菜生产。虽然目前有关芸薹生链格孢分子检测已有报道，但是这些方法以传统PCR和荧光定量PCR检测为主，对专用设备依赖性大，不能满足快速、便捷检测的需求。环介导的核酸恒温扩增技术(Loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新的分子生物学方法，该方法利用4-6条引物实现等温条件下目标片段的快速扩增。LAMP反应剧烈，在大量生成大小不等的扩增产物的同时产生肉眼可见的白色沉淀-焦磷酸镁，若在LAMP反应体系中加入金属离子指示剂如羟基萘酚蓝HNB时，在LAMP反应大量消耗Mg2+过程中，溶液逐渐变为天蓝色。可视化的显色反应极大简化了LAMP扩增产物的检测。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物，其特征在于，所述引物序列如下：/nF3：5’-ACAGGTTCGATTTCCGCAA-3’；SEQ ID NO.1；/nB3：5’-TCTCCGGGTTGTGCATGT-3’；SEQ ID NO.2；/nFIP：5’-CGATGACCAGGAGGGTGGGATTATGGCCTTGGTCCCGATAG-3’；SEQ ID NO.3；/nBIP：5’-CTCGTGGTCCCAAAGGAAAGGACGTAGATGAAGTCGTCGCC-3’；SEQ ID NO.4；/nLF1：5’-CACTACCACCAGATCTTTTACCTC-3’；SEQ ID NO.5...

【技术特征摘要】
1.一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物，其特征在于，所述引物序列如下：
F3：5’-ACAGGTTCGATTTCCGCAA-3’；SEQIDNO.1；
B3：5’-TCTCCGGGTTGTGCATGT-3’；SEQIDNO.2；
FIP：5’-CGATGACCAGGAGGGTGGGATTATGGCCTTGGTCCCGATAG-3’；SEQIDNO.3；
BIP：5’-CTCGTGGTCCCAAAGGAAAGGACGTAGATGAAGTCGTCGCC-3’；SEQIDNO.4；
LF1：5’-CACTACCACCAGATCTTTTACCTC-3’；SEQIDNO.5；
LB1：5’-AGTTTATGACACGGACGAGGA-3’；SEQIDNO.6。


2.一种LAMP检测芸薹生链格孢的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)提取芸薹生链格孢基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物进行LAMP扩增；
(3)LAMP产物检测：在反应结...

【专利技术属性】
技术研发人员：余方伟，王神云，张伟，李建斌，于利，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，南京利华农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32