利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法，所述方法利用NCBI中登录的黑熊15对具有多态性的微卫星标记进行亲权鉴定的研究，以建立一套灵敏、有效的适合东北黑熊亲子鉴定的微卫星标记系统，为今后的圈养种群的繁殖管理提供一定的理论依据。本发明专利技术中15个微卫星位点PIC值在0.4218～0.7690之间，平均PIC值为0.5735，呈中度多态性标记的有4个，高度多态性标记的有11个，平均等位基因数是7.40个。应用微卫星位点进行亲子鉴定时，其等位基因数至少为4个，本发明专利技术的结果高于此要求，此结果可信。本发明专利技术的结果所显示的微卫星位点的多态性高，在一定程度上增加了其适用的地域范围和种群范围。

Identification of genetic relationship of black bear in Northeast China using microsatellite markers

【技术实现步骤摘要】
利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法
本专利技术属于动物遗传育种与繁殖
，涉及一种利用微卫星标记进行东北黑熊亲缘关系鉴定的方法。
技术介绍
微卫星亲子鉴定是一个新兴发展起来的分子标记亲子鉴定技术。与其它子鉴定方法相比较，微卫星DNA标记有杂合度高、多态性好等优点，而且该方法在样品采集和统一检测标准方面更为方便，血液、组织、毛发以及福马林保存样品等均是很好的原材料，同时检测不受年龄和环境等因素的影响。在亲子鉴定中比其它方法有更高的准确性，特别在法医学领域中用于个体识别和亲子鉴定时，被认为是准确性最好的一种检测方法。目前，微卫星亲子鉴定在法医学鉴定、家畜系谱鉴定和濒危动物种群的系谱鉴定中应用非常广泛。养熊场内由于饲养员工作疏忽，造成子代系谱号码出现混乱，对黑熊繁殖计划的制定造成了影响。
技术实现思路
为了准确掌握黑熊的亲缘关系，本专利技术提供了一种利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法，包括如下步骤：...

【技术保护点】
1.一种利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：/n步骤一、以东北黑熊为研究对象，采用15个微卫星位点对东北黑熊进行多态性分析，其中：15个微卫星位点分别为ABB1、ABB3、ABB4、ABB5、ABB6、ABB7、ABB10、ABB11、ABB12、MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36和UT38；/n步骤二、采用QIAamp DNA Investigator试剂盒方法提取黑熊毛发基因组DNA，作为模板待用；PCR产物采用经1％琼脂糖凝胶电泳检测依据DL 2000 Marker来判断是否为目标产物，如果是目标产物，则采用12％的非变性聚丙烯酰胺凝...

【技术特征摘要】
1.一种利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
步骤一、以东北黑熊为研究对象，采用15个微卫星位点对东北黑熊进行多态性分析，其中：15个微卫星位点分别为ABB1、ABB3、ABB4、ABB5、ABB6、ABB7、ABB10、ABB11、ABB12、MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36和UT38；
步骤二、采用QIAampDNAInvestigator试剂盒方法提取黑熊毛发基因组DNA，作为模板待用；PCR产物采用经1％琼脂糖凝胶电泳检测依据DL2000Marker来判断是否为目标产物，如果是目标产物，则采用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，20bpLaddermarker用作DNA分子量标记，采用银染观察扩增产物的迁徙情况，判断子代与父本、母本基因型分布；
步骤三、将15个微卫星引物上游5’端进行荧光标记，PCR产物在ABIPRISM3730基因分析仪上进行分型，采用毛细管电泳方法进行等位基因分析，电泳数据通过GeneScan3.7和GenoTyper3.7转换成等位基因的片段大小，并自动识别等位基因，使用GeneScan-500[ROX]作为内参，等位基因长度直接从GenoTyper3.7导入Excel表中进行片段大小的分级排序，按照David的方法进行等位基因和基因型的判读；
步骤四、亲权鉴定：
(1)父权排除
父权排除包括双亲鉴定和单亲鉴定，其中：单亲鉴定即为缺少母本样品时的亲权鉴定；双亲鉴定需要分别比对子代与亲代双亲的基因型，并计算非父排除概率；
(2)父权确定
根据个体的等位基因频率计算亲权指数和亲权相对机会。


2.根据权利要求1所述的利用微卫星标记鉴定东北黑熊亲缘关系的方法，其特征在于所述ABB1、ABB3、ABB4、ABB5、ABB6、ABB7、ABB10、ABB11、ABB12、MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36和UT38的PCR扩增引物序列如下：
ABB1：
F:TGAGAAATGGGCTGAAAACC，
R:GGAGACAGGGCTTGTGATGT；
ABB3：
F:TGTGAAAAAGAAAAGGTCGGA，
R:ACAGATACCAACTCATTGAAAGG
ABB4：
F:GATCTGGAGCCAAACACG，
R:CTGCTCCTGAAGCCATAA；
ABB5：
F:CCGGGCTGTTTTCACTAGAA，
R:CCTGGGGTTCTGAATCTGAC；
ABB6：
F:TGGTGTGTCCTAGCGTGAAG，
R:CGTACCCTCCAAACCGATAA；
ABB7：
F:G...

【专利技术属性】
技术研发人员：高建伟，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23