一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶及其制备方法和应用，该重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；该重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明专利技术巧妙解决了传统的pcaH和pcaG亚基重组异二聚体蛋白活性失活的问题，诱导表达的重组pET32a‑PCAase酶既具有天然原儿茶酸3,4双加氧酶的降解原儿茶酸的能力，也具有良好的温度和pH适应性，重组酶具有表达量大及表达时间短等优点，具有巨大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，更具体地，涉及一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶及其制备方法和应用
技术介绍
原儿茶酸(Protocatechuicacid)是农业工业废水中的主要酚酸类化合物之一，它们的高浓度(每升高达几克)通常会抑制甚至消除废水处理厂或环境中丰富的细菌种群。此外，原儿茶酸是如邻苯二甲酸酯(PAEs)、多环芳烃(PAH)及菊酯类农药等芳香类化合物代谢途径中最重要的代谢物，是芳香化合物的彻底降解过程中关键的中间体。原儿茶酸3,4双加氧酶是原儿茶酸开环的关键酶，该酶催化原儿茶酸苯环，断裂形成β-羧基，顺，顺-粘糠酸，并通过一系列的酶催化作用形成进入三羧酸循环的产物，达到将芳香化合物完全降解的目的。原儿茶酸3,4双加氧酶是由两条肽链组成双亚基蛋白：pcaH基因编码的α亚基和pcaG基因编码的β亚基。这两条亚基肽链不能单独发挥功能，只有通过特定的折叠形成完整结构才能发挥其作用。目前重组异二聚体的生产主要采用如下策略：分别将α亚基和β亚基构建在不同的表达载本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO:3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


2.一种重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。


3.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求1所述重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶基因。


4.一种重组工程菌，其特征在于，含有权利要求3所述的重组载体。


5.权利要求1所述重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶基因、权利要求2所述重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶、权利要求3所述重组载体和/或权利要求4所述重组工程菌在降解原儿茶酸中的应用。


6.权利要求2所述重组双亚基编码原儿茶酸3,4双加氧酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将权利要求4所述的重组工程菌培养至菌液OD600值为0.6～0.8时，加入IPTG至0.4～0.8mM，15～20℃培养15～20h诱导表达；
S2.固液分离，收集菌体；
S3.重悬菌体，超声破碎菌体；
S4.Ni-NTA亲和层析柱纯化。


7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵海明，黄何彪，莫测辉，杜欢，蔡全英，李彦文，李慧，向垒，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44