一种检测呼吸道病原体多重real-time PCR试剂盒、方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种检测呼吸道病原体多重real‑time PCR试剂盒、方法和应用，所述试剂盒包括用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒和人偏肺病毒的试剂，所述试剂包括用于检测上述病毒的探针和特异性扩增相应病毒靶标基因的引物对、反应缓冲液、酶混合物、阳性对照和阴性对照；所述甲型流感病毒的检测通道为FAM，所述乙型流感病毒的检测通道为VIC，所述人鼻病毒的检测通道为Texas Red，所述人偏肺病毒的检测通道为Cy5。本发明专利技术所述试剂盒可以同时检测上述四种病毒，且在具有高灵敏性和特异性的同时，还简化了操作过程、缩短了检测时间、提高了检测通量、降低了检测成本，并且能够在多种荧光定量PCR仪普遍适用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测呼吸道病原体多重real-timePCR试剂盒、方法和应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种检测呼吸道病原体多重real-timePCR试剂盒、方法和应用。
技术介绍
目前临床对呼吸道病原体的诊断主要依赖传统的分离培养法，培养法虽然是临床病原诊断的金标准，但是仍存在一定的局限性，包括：(1)大量病原体培养难度高或无法进行体外培养；(2)阳性率低，假阴性率高(经常高达50％以上)；(3)检测耗时长：常规检测需要1-4天，某些慢生长型病原体需要3-4周才能获得培养结果；(4)操作繁琐：对操作者要求高，结果重复性不佳。除了传统的分离培养法，目前市场上针对呼吸道病原体的检测方案多以核酸检测为目的，这些检测方案依赖不同的技术原理。例如：(1)梅里埃的FilmArrayRPpanel，针对20种呼吸道病毒和细菌分别设计了一对内引物和一对外引物，通过巢式PCR扩增样本的核酸，产物进行溶解曲线分析，根据不同产物的溶解峰(Tm值)不同从而鉴定病原；(2)海尔施的13种呼吸道病原体多重检测试剂盒，先对样本核酸进行多重PCR扩增，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测呼吸道病原体多重real-time PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒和人偏肺病毒的试剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测呼吸道病原体多重real-timePCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒和人偏肺病毒的试剂。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于检测甲型流感病毒的探针和特异性扩增甲型流感病毒靶标基因的引物对、用于检测乙型流感病毒的探针和特异性扩增乙型流感病毒靶标基因的引物对、用于检测人鼻病毒的探针和特异性扩增人鼻病毒靶标基因的引物对、用于检测人偏肺病毒的探针和特异性扩增人偏肺病毒靶标基因的引物对。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测甲型流感病毒的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述特异性扩增甲型流感病毒靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示；
所述检测乙型流感病毒的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述特异性扩增乙型流感病毒靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；
所述检测人鼻病毒的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示，所述特异性扩增人鼻病毒靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:8和SEQIDNO:9所示；
所述检测人偏肺病毒的探针的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示，所述特异性扩增人偏肺病毒靶标基因的引物对序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应缓冲液、酶混合物、阳性对照和阴性对照。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包含MgCl2、dNTPsMixture，所述酶混合物包含AMV逆转录酶、RNA酶抑制剂、TaqDNA聚合酶，所述阳性对照为含目的基因的质粒混合物，所述阴性对照为无核酸酶水。


6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述甲型流感病毒的检测通道为FAM，所述乙型流感病毒的检测通道为VIC，所述人鼻病毒的检测通道为TexasRed，所述人偏肺病毒的检测通道为Cy5。


7.一种同时检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、人鼻病毒和人偏肺病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将采集到的临床样本进行微生物核酸提取并纯化，得到待测样品；采用所述检测呼吸道病原体多重real-timePCR试剂盒对待测样品进行检测，得到检测数据；以及对检测数据进行读取，得到检测结果。


8.根据权利要求7所述的检测方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：应斌武，李为民，宋兴勃，柯博文，陆小军，陈豪，吴涛，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51