花生突变基因及其编码的蛋白质、花生突变体的制备方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及花生突变基因及其编码的蛋白质、花生突变体的制备方法。本发明专利技术花生突变基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术通过基因组编辑系统对花生过敏原基因Arah1进行编辑产生基因序列的缺失、插入或碱基的突变，从而完成对花生过敏原基因Arah1的靶向突变，使其编码蛋白的氨基酸发生变化，进而影响表现型的变化，得到低致敏性的花生突变体，可以实现对基因位点的靶向突变，避免传统突变方法中存在的随意性、偶然性和不可知性，具有突变速度快、效率高的优点，对减少或避免花生引起的过敏具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
花生突变基因及其编码的蛋白质、花生突变体的制备方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及花生突变基因Arah1a-3-1-1、花生突变基因Arah1b-7-1-8及其编码的蛋白质、一种花生突变体的制备方法，以及一种用于检测花生突变基因的引物。
技术介绍
花生是我国重要的油料和经济作物，总产量和消费量占世界的40％，出口量占世界的30％，在国际上具有很强的竞争力。花生种子含有大量的脂肪酸、蛋白质及丰富的维生素等营养物质，可榨油、直接食用以及加工成各种糖果、糕点等食品，深受广大人民群众喜爱。花生种子平均含油量51％，主要是对人体健康有利的不饱和脂肪酸，其中油酸和亚油酸占总油脂成分的80％，品质好，营养丰富，气味清香，是市场上主要的食用油之一。花生种子中蛋白质含量约占总重量的25％，其中90％为由花生球蛋白和伴花生球蛋白组成的碱性蛋白。花生蛋白的营养价值与动物蛋白相近，但不含胆固醇，是一种高营养的植物蛋白资源，在世界植物蛋白资源中居第三位。但花生被认为是世界上最严重的食物过敏原之一，对花生过敏人数约占总人口的0.5-1.1％。在八大食物过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种花生突变基因Arah1a-3-1-1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种花生突变基因Arah1a-3-1-1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.权利要求1所述的花生突变基因Arah1a-3-1-1编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


3.一种花生突变基因Arah1b-7-1-8，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


4.权利要求3所述的花生突变基因Arah1b-7-1-8编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。


5.一种花生突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
提供花生过敏原基因Arah1、扩增引物、基因编辑载体和花生胚性愈伤组织；
以所述花生过敏原基因Arah1为模板，通过所述扩增引物进行PCR扩增，得到花生过敏原基因Arah1编码区序列Arah1a和花生过敏原基因Arah1编码区序列Arah1b；
以所述花生过敏原基因Arah1编码区序列Arah1a和所述花生过敏原基因Arah1编码区序列Arah1b的同源序列区域作为CRISPR靶点，得到sgRNAT1和sgRNAT2；
分别合成所述sgRNAT1及所述sgRNAT2的正义链和反义链，得到双链DNAT1和双链DNAT2；
将所述双链DNAT1插入到所述sgRNAT1的表达框中，然后克隆到所述基因编辑载体中，得到基因编辑载体T1；
将所述双链DNAT2插入到所述sgRNAT2的表达框中，然后克隆到所述基因编辑载体中，得到基因编辑载体T2；
将所述基因编辑载体T1、所述基因编辑载体T2中...

【专利技术属性】
技术研发人员：于为常，骆超，张旺，袁圣勇，黄彪，
申请(专利权)人：深圳大学，深圳大学龙华生物产业创新研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44