植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术提供的植物乳杆菌Y44可以清除自由基；小鼠摄食植物乳杆菌Y44，可提高肝脏抗氧化酶活力，提高肠道紧密连接蛋白的表达，维持肠道菌群平衡，调节甘油磷脂代谢，从而缓解活性氧积累对机体的损伤。具有很好的应用前景。

Application of Lactobacillus plantarum Y44 in preparation of antioxidant probiotics

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌LactobacillusplantarumY44在制备抗氧化益生菌产品中的应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种植物乳杆菌LactobacillusplantarumY44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，属于微生物

技术介绍
机体正常生理代谢会产生ROS，机体内正常水平的ROS具有参与调整细胞氧化还原电势，调节信号传导、基因表达，杀灭有害菌等作用。但是高浓度的ROS会降低氧化还原酶的活力，破坏氧化还原电势，攻击生物大分子物质，抑制细胞生长。抗氧化剂能够清除活性氧、自由基，缓解氧化损伤。但是丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)和没食子酸丙酯(PG)等合成抗氧化剂，虽然已广泛用于食品中，但其安全性受到质疑。因此，近年来从自然生物资源中筛选抗氧化剂引起了极大的关注。摄食某些乳杆菌属细菌可以帮助宿主清除休内自由基、缓解氧胁迫造成的机体损伤。
技术实现思路
本专利技术提供了一种具有抗氧化活性的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44，该植物乳杆菌Y44已于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述菌种的保藏编号为CCTCCNO：M2018558。本专利技术还提供了植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用。本专利技术还提供了植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44的如下(1)-(5)中任一所述的应用：(1)制备清除自由基产品；(2)制备提高抗氧化酶活力产品；(3)制备提高肠紧密连接蛋白表达产品；(4)制备调节肠道菌群组成产品；(5)制备调节甘油磷脂代谢产品。专利技术作用与效果：本专利技术的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44可以清除氧自由基；提高氧化损伤小鼠的肝脏抗氧化酶活力；提高氧化损伤小鼠的结肠紧密连接蛋白表达；改善氧化损伤小鼠的肠道菌群多样性，提高乳杆菌属相对丰度；调节氧化损伤小鼠的甘油磷脂代谢；从而具有良好的抗氧化作用。因此本专利技术的植物乳杆菌Y44具有广阔的应用价值。附图说明图1为植物乳杆菌Y44显微镜图片(100×10)。图2为植物乳杆菌Y44的溶血性实验。图3为植物乳杆菌Y44的产生物胺能力实验。图4为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肝脏结构的影响(40×10)。图5为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肝脏抗氧化酶活力的影响，A：MDA含量；B：SOD活力；C：GPx活力；D：CAT活力。图6为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠结肠紧密连接蛋白表达量影响，A：Claudin-1相对表达量；B：Occludin表达量；图7为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肠道菌群门水平影响，A为各组门水平组成Bar图，B为各组门水平相对丰度。图8为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肠道菌群科水平影响，A为各组科水平组成Bar图，B为各组科水平相对丰度。具体实施方式下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1菌株培养与安全性本专利技术的植物乳杆菌Y44在MRS培养基中进行培养活化，具体步骤如下：一、菌株培养方法(1)MRS培养基制备按照20g/L葡萄糖，10g/L蛋白胨，5g/L酵母膏，10g/L牛肉膏，1mL吐温80，2g/L磷酸氢二钾，2g/L柠檬酸二铵，5g/L乙酸钠，0.58g/L七水硫酸镁，0.25g/L四水硫酸锰，2％琼脂；称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度121℃下灭菌20min，得到所述的MRS培养基。植物乳杆菌Y44划线接种于含有2％琼脂的步骤(1)培养基中，在温度37℃下厌氧培养48h～72h，挑取单菌落，进行革兰氏染色，采用显微镜进行形态学观察，同时进行过氧化氢酶试验，微生物菌种的移接的所有操作，均应在无菌环境下严格的无菌操作。二、菌株染色采用革兰氏染色法对菌株染色，镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。三、菌株过氧化氢酶试验接种环挑取上述植物乳杆菌Y44菌株于含有3％过氧化氢溶液液滴的载玻片上，如有大量气泡产生为阳性，否则为阴性。将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性的植物乳杆菌Y44，接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养24h～48h后，委托大连宝生物公司进行16SrDNA测序鉴定，序列如SEQIDNO.1所示，鉴定结果为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44的显微镜图片(100×10)如图1所示。四、菌株保藏所述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44的菌种保藏号为CCTCCNO：M2018558，保藏日期为2018年8月21日，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，菌株名称为Y44。五、菌株安全性(1)评价植物乳杆菌Y44的溶血性。培养基配置方法：Columbia琼脂培养基中加入7％(v/v)山羊血。将活化好的植物乳杆菌Y44、L.rhamnosusGG(ATCC53103)及L.MonocytogenesEGDE(ATCCBAA-679)划线接种于Columbia固体培养基中，37℃培养48h。若菌落周围有透明圈出现则具有β-溶血性，若无透明圈出现则具有γ-溶血性，其中具有β-溶血性的菌株通常具有致病性。以L.MonocytogenesEGDE作为阳性对照。证明植物乳杆菌Y44不具有溶血性，是一株较为安全的菌株。见图2。(2)评价植物乳杆菌Y44的抗生素敏感性。根据美国临床实验室标准化委员会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI)标准[99]的方法，选择抗生素(氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素、万古霉素)进行植物乳杆菌Y44抗生素敏感性试验。证明植物乳杆菌Y44对氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素均具有敏感性，具有安全性，见表1。表1植物乳杆菌Y44对抗生素的临界值(μg/mL)S：对抗生素敏感n.r.：即不需要测定(3)评价植物乳杆菌Y44产生物胺能力。脱羧酶培养基配置方法：改良氨基脱羧酶琼脂培养基中分别加入不同1％(w/v)的前体氨基酸(酪氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、精氨酸)，并调整pH至5.3。首先，将L.pla本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44已于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述菌种的保藏编号为CCTCC NO：M 2018558。/n

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Y44已于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述菌种的保藏编号为CCTCCNO：M2018558。


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【专利技术属性】
技术研发人员：妥彦峰，牟光庆，高原，宋莹龙，李新玲，姜淑娟，钱方，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21