用于癌症治疗的精氨酸酶抑制制造技术

本发明专利技术涉及一种治疗癌症的方法，所述癌症包括血液学癌症和实体瘤。在实施例中，所述方法包括损害免疫细胞(特别是患有癌症的患者的T细胞)中的精氨酸酶活性和/或表达。通过精氨酸酶编码基因的突变(包括缺失或截短)、RNA干扰或精氨酸酶抑制剂的施用可能会损害精氨酸酶的表达。在优选的实施例中，T细胞在CAR(嵌合抗原受体)治疗框架中进行修饰。本发明专利技术还提供了将精氨酸酶活性受损与抗体介导的负性免疫检查点调节剂的阻断(PDL1‑PD1和B7‑CTLA4抑制途径)组合的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的精氨酸酶抑制
本专利技术涉及用于治疗癌症的免疫细胞、试剂盒、方法和组合物，特别是在癌症免疫疗法和/或过继细胞转移疗法领域。本专利技术还涉及用于生产细胞、试剂盒和组合物的方法。
技术介绍
免疫系统在抑制恶性肿瘤的发生、抑制肿瘤进展和促进肿瘤消除方面发挥根本作用。为了逃逸免疫监视，肿瘤倾向于执行多种逃逸机制。免疫逃逸策略包括产生抗炎细胞因子、募集包含调节性T细胞(Tregs)和髓样来源的抑制性细胞(MDSC)的抑制性细胞、负性T细胞共刺激分子的表达以及T细胞免疫抑制代谢途径的活化。通过抑制这种逃逸机制增强靶向肿瘤的免疫应答是具有重大治疗前景的策略。抗体介导的负性免疫检查点调节剂阻断是迄今为止最有希望和最成功的免疫治疗方法之一。此类免疫检查点途径通常通过终止或减弱过度T细胞应答以预防或减轻免疫病理。肿瘤细胞利用这种机制防止T细胞攻击。通过治疗干预的方式释放这些“阻碍”可因此恢复有效的抗肿瘤免疫应答。然而，尽管通过干扰PDL1-PD1和B7-CTLA4抑制途径获得了空前的成功，但目前的检查点阻断疗法并未在所有患者中引发有效的抗肿瘤免疫应答，并未对所有类型的癌症均有作用，仅具有部分疗效，或肿瘤对检查点阻断产生耐受性。癌症免疫疗法的另一种形式包括利用患者的免疫细胞通过过继细胞疗法根除癌症，其形式为患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的离体扩增和对肿瘤抗原产生应答的活化T淋巴细胞群的回输，或取出患者的外周血T淋巴细胞，然后进行离体基因修饰，以表达转基因T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)靶向已知的肿瘤抗原，然后回输至患者体内以破坏癌细胞。CART细胞免疫疗法已在血液学肿瘤中显示出空前的成功，但到目前为止，使用CART细胞治疗实体瘤在很大程度上是不成功的，部分原因是免疫抑制性肿瘤的微环境。另外，在体外产生过程中需要予以相当的关注以防止CART细胞过度耗竭或分化。因此，迫切需要开发旨在单独使用或与现有疗法联合使用以诱导强抗肿瘤应答的新策略。特别地，涉及不同免疫治疗剂的协同治疗联合以及其他互补疗法可能构成将来成功抗癌治疗的基础。值得进一步研究的一种治疗策略是通过抑制抗肿瘤免疫应答来干扰有利于肿瘤生长的代谢途径。在这些证据中，越来越多的证据表明，L-精氨酸代谢的治疗性操纵可有助于增强抗肿瘤免疫应答。L-精氨酸是半必需氨基酸，需要某些细胞特别是免疫系统的某些细胞(包括T细胞和巨噬细胞)从细胞外环境中吸收。充分的L-精氨酸可获得性对于这些细胞的最佳功能至关重要。在T细胞的情况下，L-精氨酸消耗导致CD3-ζ链表达减少，经T细胞受体(TCR)-CD3复合物的信号传导受损以及抗原特异性T细胞活化、增殖和细胞毒性的抑制。L-精氨酸是精氨酸酶(ARG)和一氧化氮合酶(NOS)的底物。NOS的L-精氨酸分解代谢导致NO和其他反应性氮中间体的产生，这是导致巨噬细胞抗病原体细胞毒活性的关键机制。ARG将L-精氨酸转化为尿素和L-鸟氨酸，该反应因其在尿素循环中对肝脏中氨的解毒作用而闻名。L-鸟氨酸被进一步加工成多胺和脯氨酸。已经发现，ARG和NOS酶在肿瘤中的表达增加，无论是在肿瘤细胞本身中还是在肿瘤浸润细胞中，诸如巨噬细胞和髓样来源的抑制细胞(MDSC)。在肿瘤微环境(TME)中，NOS介导的NO产生促进肿瘤血管生成和转移，而ARG介导的脯氨酸可获得性增加和多胺合成促进肿瘤细胞增殖。此外，肿瘤中由ARG和NOS表达诱导的L-精氨酸消耗有助于通过上述机制建立免疫抑制性微环境，这种微环境损害抗肿瘤T细胞应答。哺乳动物有两种ARG酶，分别是由两个不同的基因编码的精氨酸酶1(ARG1)和精氨酸酶2(ARG2)。两种酶催化相同的生化应答，在其催化位点显示100％同源性，并且均被目前可获得的ARG抑制剂抑制。ARG1和ARG2在细胞内定位和表达方式方面有所差异。ARG1是一种胞质酶，主要在肝脏中表达，但也可以在几种非肝组织和细胞类型中表达。ARG2位于线粒体中，并在多种组织中广泛表达。在Dunand-SauthierI.etal,"Repressionofarginase-2expressionindendriticcellsbymicroRNA-155iscriticalforpromotingTcellproliferation",JImmunol.193:1690-1700(2014)的出版物中发现ARG2是树突细胞(DC)中表达的主要精氨酸酶，并且在DC成熟过程中，miR155抑制其相应的mRNA。在活化的miR155缺失的DC中观察到ARG2表达和活性异常升高。相反，miR155的过表达抑制DC中ARG2的表达。众所周知，miR155可控制不同细胞类型中的不同基因，而且尚未报道miR155是否也可控制其他细胞类型(包括T细胞)中ARG2的表达。WO2014059248教导了通过将编码miR155转录物的核酸分子离体引入从受试者分离的T细胞中以增加T细胞介导的免疫的方法。US2015/275209类似地教导了分离的或纯化的CD8+T细胞，其包括抗原特异性T细胞受体(TCR)和编码微小RNA分子的外源核酸。WO2014059248和US2015/275209均未公开miR-155在T细胞中的活性方式。在GraciasD.etal,“MicroRNA-155controlsCD8+Tcellresponsesbyregulatinginterferonsignaling”,NatImmunol.14:593-602(2013)中发现miR155调节CD8+T细胞中845个基因的表达，其中大多数显示小于2倍的差异表达，这表明miR155适度影响大量转录本，而不是对单独靶标具有强影响。Graciasetal.在miR155调节其表达的845个基因中未识别ARG2。因此，这些参考文献并未表明ARG2可能是T细胞中miR155的靶标且miR155的作用是通过抑制T细胞中的ARG2介导的。若干专利文献涉及精氨酸酶抑制剂。EP2768491B1公开了用于治疗多种病症的小分子精氨酸酶抑制剂，所述病症诸如心血管疾病、性疾病、伤口愈合疾病、胃肠疾病、自身免疫疾病、免疫疾病、感染、肺疾病、纤维化疾病和溶血性疾病。EP2083812B1公开了用于治疗过敏性和非过敏性哮喘以及过敏性鼻炎的小分子精氨酸酶抑制剂，诸如6-硼诺-L-正亮氨酸(ABH)。WO2007/111626公开了用于治疗动脉粥样硬化疾病的ARG2活性调节，包括用于沉默ARG2的siRNA。US9789169公开了用于消耗血浆精氨酸水平的重组ARG1蛋白，其目的是调节免疫系统，特别是防止移植器官的排斥。本专利技术的目的是提供一种治疗癌症的方法，其优选地有效抗造血肿瘤和/或实体瘤。本专利技术的目的是改善基于嵌合抗原受体(CAR)T细胞和/或转基因T细胞受体T细胞的疗法和/或基于与免疫检查点调节剂的相互作用和/或阻断的疗法的疗效。例如，目的是提供改善现有癌症疗法或现有治疗概念的方法。本专利技术的目的是提供可以与其他癌症治疗(包括免疫治疗剂)协同使用的癌症治疗。本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫细胞，所述免疫细胞具有组成性或诱导性受损的精氨酸酶活性和/或表达，其用于通过过继细胞转移来治疗癌症。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180128 EP 18153782.01.一种免疫细胞，所述免疫细胞具有组成性或诱导性受损的精氨酸酶活性和/或表达，其用于通过过继细胞转移来治疗癌症。


2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中，所述受损的精氨酸酶活性和/或表达是受损的精氨酸酶2活性和/或表达。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫细胞，用于治疗选自由白血病、淋巴瘤和/或实体瘤组成的组的一种或多种癌症。


4.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其中，通过损害所述精氨酸酶的表达而使所述精氨酸酶活性受损，例如通过：
-突变、截短或删除编码所述精氨酸酶的基因，
-施用、突变、截短或删除编码转录因子的基因，所述转录因子是所述编码精氨酸酶的基因的转录因子，
-施用对能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列进行编码的核苷酸序列，或施用将能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列包括在内的核苷酸序列。


5.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其中，所述精氨酸酶活性通过将所述细胞暴露于用于损害所述精氨酸酶活性和/或表达的离体处理而受损。


6.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中，所述受损的精氨酸酶活性是由于在所述免疫细胞中离体施用能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核酸分子，或施用编码此类核酸分子的载体。


7.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其选自T细胞、自然杀伤细胞也即NK细胞、先天性淋巴样细胞和树突细胞。


8.根据权利要求7所述的免疫细胞，其选自CD3+和/或CD4+和/或CD8+T细胞。


9.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其进一步包含嵌合抗原受体CAR和/或转基因T细胞受体，其中，所述CAR优选地包括通过接头与T细胞信号传导结构域融合的抗原结合结构域，优选地在CD3ζ信号传导结构域中。


10.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其与靶向和/或特异性结合负性免疫检查点调节剂的癌症治...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒂伯特·德斯梅特，沃尔特·瑞斯，阿德里亚阿尔瑙·马蒂林德兹，伊莎贝尔·邓南德绍蒂耶，
申请(专利权)人：日内瓦大学，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH