图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法及其应用，属于纳米材料领域。本发明专利技术公开的三明治型光学检测芯片上吸附的外泌体囊泡，其表面特异性吸附的金纳米颗粒探针密度与对应的外泌体膜蛋白表达量呈正相关。借助SERS Mapping技术对多个光学芯片进行采谱后可以同时采集多种拉曼探针分子的信号并直接生成图案化的数据输出，所得的图案化数据无需繁琐的处理，能直观体现不同来源外泌体的多种膜蛋白表达量。利用本发明专利技术能够一次性分析并获得多种免疫逃逸相关外泌体膜蛋白的表达量，进而同时指导多种癌症免疫诊疗方法，这为新型的癌症诊疗策略提供新的思路和启发。

【技术实现步骤摘要】
图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法及其应用
本专利技术属于纳米材料领域，具体涉及一种图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法及其应用。
技术介绍
外泌体是源于内吞作用的小脂双层膜包裹的纳米囊泡(直径为30-120nm)。所有细胞都能分泌外泌体，因而其广泛存在于唾液、尿液、牛奶和血液等生物体液中。研究发现恶性肿瘤病人外周血中往往比健康人具有更多的外泌体，且这些外泌体具有来自肿瘤细胞的标记物质，这部分外泌体被称为肿瘤来源外泌体。肿瘤来源外泌体可广泛影响肿瘤微环境，在肿瘤发生、增殖分化、侵袭转移、药物抵抗以及免疫逃逸中均发挥着重要作用。其中免疫逃逸是导致恶性肿瘤增殖的关键环节，通常肿瘤细胞通过隐蔽肿瘤抗原、释放免疫抑制性分子以及直接与淋巴细胞相互作用来躲避或抑制免疫反应。最近有研究表明，肿瘤来源外泌体膜上携带有多种免疫抑制性分子，这使得肿瘤细胞可通过释放外泌体来抑制免疫杀伤细胞的活性功能，在外泌体膜上所携带的这些免疫抑制性蛋白中：(1)PD-L1配体：可以与CD8+T细胞上的相应受体结合，导致该类细胞功能衰竭或凋亡；(2)人类白细胞抗原HL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法，其特征在于：借助抗体抗原的特异性修饰作用形成基底-外泌体-SERS探针三明治型夹心结构，然后在拉曼光谱仪测试下利用片区Mapping技术实现对外泌体的多种膜蛋白表达量的图案化检测；包括如下步骤：/n(1)利用抗体抗原的特异性相互作用，首先将修饰有CD63抗体的金基底与外泌体纳米囊泡于室温下共孵育，清除多余外泌体后最终得到有外泌体囊泡附着的平面SERS基底；/n(2)继续通过抗体抗原相互作用使提前修饰有不同抗体和不同拉曼探针的金纳米靶向颗粒和被外泌体囊泡附着的平面SERS基底在液相环境下共孵育，清除多余金纳米颗粒最终得到基底-外泌体-SERS探针三明治型夹...

【技术特征摘要】
1.图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法，其特征在于：借助抗体抗原的特异性修饰作用形成基底-外泌体-SERS探针三明治型夹心结构，然后在拉曼光谱仪测试下利用片区Mapping技术实现对外泌体的多种膜蛋白表达量的图案化检测；包括如下步骤：
(1)利用抗体抗原的特异性相互作用，首先将修饰有CD63抗体的金基底与外泌体纳米囊泡于室温下共孵育，清除多余外泌体后最终得到有外泌体囊泡附着的平面SERS基底；
(2)继续通过抗体抗原相互作用使提前修饰有不同抗体和不同拉曼探针的金纳米靶向颗粒和被外泌体囊泡附着的平面SERS基底在液相环境下共孵育，清除多余金纳米颗粒最终得到基底-外泌体-SERS探针三明治型夹心结构；
(3)在拉曼光谱仪测试下通过片区SERSMapping技术扫描上述光学芯片可以同时实现外泌体的多种膜蛋白表达量的高通量、图案化检测。


2.根据权利要求1所述的图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，修饰有CD63抗体的金基底与外泌体纳米囊泡于室温下共孵育的时间为2h，其中金基底需提前切成2mm×2mm的正方形小片。


3.根据权利要求1或2所述的图案化的外泌体膜蛋白表达量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，修饰有拉曼探针的金纳米颗粒在进行特定抗体修饰前，需在13000rpm转速下离心10min并取上清液留沉淀用2mLPBS悬浮液重悬备用；
所述步骤(2)中，金纳米颗粒可以按照所修饰的抗体与拉曼探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖湘衡，董仕练，蒋昌忠，
申请(专利权)人：武汉大学苏州研究院，
类型：发明
国别省市：江苏;32