一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法技术

本发明专利技术公开了一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法，它包括如下步骤：1)取全血，加分离液混合，静置；2)取步骤1)所得上清液，2～8℃保存1‑2天，即得PBMC悬液；或：取步骤1)所得上清液，离心，取下层细胞，加保存液重悬，‑150℃冻存180～360天，即得冻存PBMC。本发明专利技术分离PBMC的方法，与常用方法相比大大节省了血样处理时间，简化了操作步骤，减少了对离心机等仪器的依赖，可用于病房，诊所及事故发生地血样的及时处理，并用于流式细胞检测CD4和CD8，具有实际推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法
本专利技术具体涉及一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法。
技术介绍
PBMC(Peripheralbloodmononuclearcell)即外周血单个核细胞，指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。人体免疫细胞，如CIK细胞、DC细胞、NK细胞、DC-T细胞，均由PBMC诱导分化而来，若要获得上述免疫细胞，需要先自外周血中分离PBMC。外周血含有血小板、PBMC、红细胞和多核白细胞等多种细胞，PBMC的密度与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞密度较大，为1.090kg/m3左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090kg/m3，血小板为1.030～1.035kg/m3。为此利用一种密度介于1.075～1.092kg/m3之间而近于等渗的溶液(分层液)做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，便可将各种血细胞加以分离。常用的PBMC分离方法有Ficoll分离法和Percoll分离法两种。Percoll分离法操作流程较长，手续较为繁琐；相比之下Ficoll本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法，其特征在于：它包括如下步骤：/n1)取全血，加分离液混合，静置，/n2)取步骤1)所得上清液，2～8℃保存1-2天，即得PBMC悬液；或：/n取步骤1)所得上清液，离心，取下层细胞，加保存液重悬，-150℃冻存180～360天，即得冻存PBMC。/n

【技术特征摘要】
1.一种可用于流式细胞检测的简便PBMC分离方法，其特征在于：它包括如下步骤：
1)取全血，加分离液混合，静置，
2)取步骤1)所得上清液，2～8℃保存1-2天，即得PBMC悬液；或：
取步骤1)所得上清液，离心，取下层细胞，加保存液重悬，-150℃冻存180～360天，即得冻存PBMC。


2.根据权利要求1所述PBMC分离方法，其特征在于：所述全血与分离液的体积比为3～6：1，优先体积比为5：1。


3.根据权利要求1或2所述PBMC分离方法，其特征在于：所述分离液是羟乙基淀粉溶液。


4.根据权利要求3所述PBMC分离方法，其特征在于：所述羟乙基淀粉溶液中羟乙基淀粉分子量为45～70万，优选48万；和/或，所述羟乙基淀粉溶液浓度为4～8％，g/ml，优选6％，g/ml。


5.根据权利要求1或2所述PBMC分离方法，其特征在于：所述全血为混有抗凝剂的全血；所述抗凝剂与全血的质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟大超，吴沙沙，周轶，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51