中枢神经系统中毒的体外模型及评价重活化剂疗效的方法技术方案

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：(1)获得transwell体外血脑屏障模型；(2)将浓度0.065～0.20mg/ml的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10

【技术实现步骤摘要】
中枢神经系统中毒的体外模型及评价重活化剂疗效的方法
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型，还涉及体外评价乙酰胆碱酯酶重活化剂疗效的方法。
技术介绍
以往研究已经证明，中枢神经系统有机磷化合物中毒后会立即抑制神经中枢的乙酰胆碱酯酶，导致中枢的乙酰胆碱大量蓄积，最终引发中毒人员出现惊厥、脑损伤甚至死亡。救治有机磷化合物中毒的主要药物是重活化剂，它是一类能迅速恢复乙酰胆碱酯酶功能的药物。目前，体外评价重活化剂药效的方法是：先将有机磷毒剂与乙酰胆碱酯酶结合构建体外中毒模型，然后直接加入重活化剂评价药效，但这种方法的评价结果与体内药效评价结果往往差异非常大。另外，体内评价重活化剂药效的方法虽然相对准确，但其研究成本颇高、效率低，无法做到大量、快速检测和筛选药物。近年来的研究发现，药物进入神经中枢主要受血脑屏障的限制，血脑屏障是横跨循环系统与中枢系统的致密生物膜系统，其主要通过空间屏蔽、电荷屏蔽及脂溶性屏蔽等作用限制大分子、正电荷及水溶性药物进入神经中枢。目前，涉及血脑屏障的体外模型具有代表性的是tra本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：/n(1)获得transwell体外血脑屏障模型；/n(2)将浓度0.065～0.20mg/ml的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10

【技术特征摘要】
1.一种建立中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型的方法，包括如下步骤：
(1)获得transwell体外血脑屏障模型；
(2)将浓度0.065～0.20mg/ml的乙酰胆碱酯酶溶液和体积百分比浓度为0.5×10-8～10-3的有机磷化合物溶液以(1～10):1体积比依次加入至所述transwell体外血脑屏障模型的下池中，静置1至10分钟，得到中枢神经系统有机磷化合物中毒的体外模型。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，有机磷化合物选自含碳-磷单键的有机磷化合物和含有机官能团的磷酸衍生物；
优选地，有机磷化合物选自沙林和诺维乔克；
更优选地，有机磷化合物为沙林，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为10-7～10-3，进一步优选为10-6；
更优选地，有机磷化合物为诺维乔克，有机磷化合物溶液的体积百分比浓度为0.1×10-8～10-5，进一步优选为0.5×10-8。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，乙酰胆碱酯酶溶液为1～2ml，有机磷化合物溶液为0.2～1ml；
优选地，乙酰胆碱酯酶溶液和/或有机磷化合物溶液采用的溶剂为ECM-PRF基础液。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，步骤(1)中，通过如下的步骤获得transwell体外血脑屏障模型：
在位于培养板的板孔内的transwell小室的膜上接种内皮细胞，向上池和下池加入培养基，待培养至细胞长满膜表面，即得到所述transwell体外血脑屏障模型；
优选地，其特征在于如下a至g中的一项或多项：
a.所述内皮细胞为脑微血管内皮细胞，更优选自鼠脑微血管内皮细胞、猪脑微血管内皮细胞、牛脑微血管内皮细胞、人脑微血管内皮细胞和bEnd.3细胞，进一步优选为鼠脑微血管内皮细胞；
更优选地，所述脑微血管内皮细胞为原代脑微血管内皮细胞；
更优选地，通过两次酶消化法提取得到脑微血管内皮细胞；
b.transwell小室中膜的材料为聚乙烯膜和/或聚碳酯膜；
c.在接种前，将纤维粘连蛋白(例如牛纤维粘连蛋白)负载在tra...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永安，杨军，李尧，黄静宜，隋昕，孟凡荣，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11