一种精确检测发酵液中丁二胺含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种精确检测发酵液中丁二胺含量的方法，属于生物工程检测领域。本发明专利技术是针对发酵液这一复杂体系，基于内标的添加以及校准曲线的校准，对现有生物胺检测方法进行了优化与改进，实现了发酵液中丁二胺的准确定量，相对误差在5.40％％以内。这种校准方法消除了复杂体系对丁二胺检测的干扰，解决了丁二胺生物合成过程中检测困难的问题，为实现生物法生产丁二胺的工业化进程奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种精确检测发酵液中丁二胺含量的方法
本专利技术涉及一种精确检测发酵液中丁二胺含量的方法，属于生物工程检测领域。
技术介绍
丁二胺，又称腐胺或1,4-二氨基丁烷，是一种工业价值很高的二元胺，可应用于塑料、药物、农用化学品和表面活性剂等的工业生产中。丁二胺作为单体与己二酸共聚生产的尼龙4,6是一种高性能聚酰胺材料，因其具有高熔点、高机械强度和优异的耐溶剂性等优点被广泛应用于工业机械、汽车制造、航空航天、电子配件、纺织品和服装等领域。目前工业上普遍采用化学方法生产丁二胺，该方法需要使用不可持续的石油原料、昂贵的催化剂，并且反应过程具有易燃易爆等安全隐患，这限制了丁二胺的进一步工业化应用。针对上述问题，丁二胺的生物合成法成为了一个有效的选择。但复杂的发酵液体系给生物法生产丁二胺的精确检测造成了一定困难，如何检测发酵液中的丁二胺含量以及评价工程菌的丁二胺生产能力是目前生物合成丁二胺研究中亟待解决的瓶颈问题之一。当前，薄层色谱(TLC)，离子色谱(IC)，气相色谱(GC)以及高效液相色谱法(HPLC)普遍用于丁二胺含量的检测，在这其中，H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测发酵液中丁二胺含量的方法，其特征在于，以1,7-庚二胺和/或1,6-己二胺二盐酸盐为内标物，对加入内标物的发酵液进行HPLC检测，再用校准模型对检测结果校准，计得到丁二胺含量；/n所述校准模型为：

【技术特征摘要】
1.一种检测发酵液中丁二胺含量的方法，其特征在于，以1,7-庚二胺和/或1,6-己二胺二盐酸盐为内标物，对加入内标物的发酵液进行HPLC检测，再用校准模型对检测结果校准，计得到丁二胺含量；
所述校准模型为：其中，K：转换系数，A1：丁二胺衍生物峰面积，T1：发酵液体系中丁二胺浓度，A2：内标衍生物峰面积，T2：内标浓度。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转换系数是以发酵液中的干扰物浓度为参比计算获得。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述干扰物为酵母提取物、多肽或氨基酸。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)建立模拟丁二胺发酵液体系：向用于微生物发酵的培养基中加入不同浓度的酵母提取物，建立不同的培养基体系，然后向建立的培养基体系中加入丁二胺标准品，得到不同浓度的模拟丁二胺发酵液体系；
(2)待测样品前处理：在步骤(1)建立的每个丁二胺发酵液体系中添加内标物和衍生试剂丹磺酰氯进行衍生化反应，然后用乙醚进行萃取，将萃取液氮吹，再用乙腈溶液复溶，经滤膜过滤后进行HPLC检测；
(3)建立丁二胺检测校准曲线：根据步骤(2)测定的丁二胺和内标物的丹磺酰氯衍生物浓度绘制内标物峰面积与酵母抽提物浓度的关系曲线A和酵母抽提物浓度与转换系数K的关系曲线B；
(4)待测丁二胺发酵液样品前处理：向待测发酵液样品中加入内标物和衍生试剂丹磺酰氯进行衍生化反应，然后用乙醚进行萃取，将萃取液氮吹，再用乙腈溶液复溶，经滤膜过滤后进行HP...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓禹，李国辉，黄荻萱，毛银，赵运英，周胜虎，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32