MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌O157的方法技术

技术编号:2621981 阅读:223 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌O157的方法,构建重组质粒,设计合成引物和Taqman-MGB探针,进行二重荧光定量PCR,将大肠杆菌O157的rfbE、vt2的一段保守序列进行PCR扩增,获得目的片断,再将目的片断与PMD  18-T  Vector连接,得到重组质粒,将重组质粒转化DH5a感受态大肠杆菌细胞,扩大培养,获得高浓度的质粒,将此高浓度质粒作10倍比稀释,作为标准样品,将标准样品和待测样品共同作二重荧光定量PCR,标准样品形成标准曲线,根据标准曲线可计算出待检样品中大肠杆菌O157的含量。本发明专利技术使用MGB探针,具有更高的敏感性和特异性,能快速、准确地检测样本中的大肠杆菌O157含量,可同时检测大肠杆菌O157的两个特异性毒力基因,是一种快速、准确的大肠杆菌O157检测方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌O157的方法,其特征在于,设计合成rfbE、vt2引物和Taqman-MGB探针,分别用rfbE、vt2引物进行PCR扩增,获得两个目的片断,将目的片断分别与PMD18-TVector连 接,得到重组质粒,将重组质粒转化DH5α感受态大肠杆菌细胞,扩大培养,提取高浓度的重组质粒,将此高浓度质粒作10倍比稀释,作为标准样品,将标准样品和待测样品共同作二重荧光定量PCR,标准样品形成标准曲线,根据标准曲线计算出待检样品中大肠杆菌O157的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:严亚贤朱向玲孙建和陆承平
申请(专利权)人:上海交通大学
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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