基于磁分离与固相单碱基循环延伸技术的单碱基差异检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于磁分离和固相单碱基循环延伸技术（ＳｉｎｇｌｅＢａｓｅ　Ｃｉｒｃｕｌａｒ　Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ，ＳＢＣＥ）的单碱基差异（Ｓｉｎｇｌｅ　Ｂａｓｅ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，ＳＢＤ）检测新方法。其特征在于以磁性颗粒为载体固定待检测位点的延伸引物，在Ｔａｑ酶作用下将特定荧光标记的ｄｄＮＴＰ将延伸在引物３’端，通过包含有变性、退火和延伸的热循环反应，将模板的基因型信号放大。本发明专利技术具有简单、准确、低成本、高通量、高灵敏度的特点，并且该方法能够实现自动化运行，与传统方法相比该方法具有更高的实用性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因检测
，特别涉及 一 种基于磁分离与固相单碱 基循环延伸技术的单碱基差异检测方法。二
技术介绍
现有技术研究与遗传表型相关的DNA序列变异成为了后基因组 时代研究的主题之一。因此，对人类基因组中最常见的变异——单碱 基差异(Single Base Difference, SBD)的研究也成为了热点，其主要包 括单碱基的缺失，插入，置换，以及单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)。 SNP是人类基因组中最常见的单碱 基差异，在基因组中出现频率很高，据估计每300-1000个碱基中即出 现一次，分布密度远大于微卫星重复序列等，因而成为目前最常用的 第三代遗传标志物。在不同的人群中，SNP的频率分布有差异，这些 差异可以代表某一种族或人群间的遗传差异。因此，研究SNP有助于 解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病，特别是对复杂疾病的易感性，以及对各种药物的耐受性和对环境因子的反应。因此，建立 一种快速、准确、高通量且适用于临床的SNP检测方法具有时间上的 紧迫性，同时该方法应具备一定的通用性，能够对组织样本中低突本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于磁分离与固相单碱基循环延伸技术的单碱基差异检测方法，其特征在于检测步骤为：　ａ．磁性纳米颗粒的修饰：对无荧光背景的磁性颗粒表面进行功能化修饰，使磁性颗粒表面具有特定化学基团或生物大分子，所述特定化学基团或生物大分子为胶体金、亲合素或醛基；　ｂ．设计引物的修饰：选取待检测的重要功能ＳＮＰ位点或突变位点，根据上述位点碱基序列设计单碱基循环延伸引物，所设计的引物５’端经过功能化修饰有与磁性颗粒表面胶体金、亲合素或醛基对应的巯基、生物素或氨基，３’端最后一个碱基与待检测位点的上游一个碱基互补；　ｃ．固相引物的制备：通过共价结合法，将一端有标记物的单碱基循环延伸引物通过胶体金－巯基、亲合素－生物...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李松，何农跃，刘洪娜，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]