分泌性白细胞蛋白酶抑制剂通过糜酶的加工制造技术

现在发现，人糜酶在特异性位点裂解人ＳＬＰＩ，并且这种裂解可以用作糜酶活性的指示。本发明专利技术提供了通过测量ＳＬＰＩ加工来诊断人受试者的糜酶相关疾病或评价对人受试者的糜酶相关疾病治疗效果的方法，以及其它相关方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及分析糜酶(chymase)活性的方法。具体而言，本专利技术涉 及诊断糜酶相关疾病或者通过测量SLPI加工来评价人受试者的糜酶 相关疾病的治疗效率。
技术介绍
分泌性白纟田月包蛋白酶4卬制剂(Secretory Leukocyte Protease Inhibitor, SLPI)作为弹性蛋白酶和组织蛋白酶G的11.7kD抑制剂而被 首次发现(Thompson等，Proc Natl Acad Sci U S A (《美国国家科学院 院刊》)1986; 83:6692-6)。 SLPI由肥大细胞表达(Westin等，BiolChem 1999; 380:489-93)，并存在于上气道粘膜(Fryksmark等，Ann Otol Rhinol Laryngol 1982; 91:268画7l)和痰(Kramps等，J Histochem Cytochem 1981; 29:712-9)中。已在鼻腔(Lee等，Am Rev Respir Dis 1993; 147:710-6)、气管和支气管(Kramps等，Am Rev Respir Dis 1984; 129:959-63; Mooren等，J Histochem Cytochem 1982; 30:1130-4)、上 颌窦(Fryksmark等，出处同上)以及细支气管上皮的杯状细胞(Willems 等，Am Rev Respir Dis 1989; 139:1244-50)中测量出大量的SLPI。SLPI的晶体学研究已表明，该分子属于乳清酸性蛋白样家族中的 成员(Grutter等，Embo J 1988; 7:3M-:51)。这些蛋白质具有两组4个 二硫4建连接起来的结构域。每个结构域的4个二辟b键以及螺旋结构使 SLPI成为非常稳定的蛋白质。已经表明，牛(Grutter,出处同上)和绵 羊(Pemberton等，Biochim Biophys Acta 1998; 1379:29-34)的肥大细胞 蛋白酶在Leu72-Met73处裂解SLPI。其它研究显示出SLPI的一种较 低分子量的加工产物，但还没有描述负责这种裂解的酶的特征(Ota等， Hum Reprod 2002; 17:2517-22)。 SLPI被描述为糜酶的最有效抑制剂 (Walter等，Arch Biochem Biophys 1996; 327:81-8;以及Fink等，Biol Chem Hoppe Seyler 1986; 367:567-71)。糜酶是一种属于肽酶家族SI的糜蛋白酶型丝氨酸蛋白酶，其在皮肤和肺的肥大细胞和小球白细胞中表达，并祐:认为在胞外基质的降 解、粘膜下腺体分泌的调节和血管活性肽的生成中起作用。 一旦肥大细胞激活后，该糜酶被释放进胞外基质，其立即具有最大活性(Takai 等，FEBS Lett467: 141-144， 2000)。有两种形式的哺乳动物糜酶，即 a糜酶和p糜酶，它们在物种上不同并具有不同的功能。在人和狒狒 中，只发现了a-糜酶，而在狗、大鼠和小鼠中a-糜酶和(3-糜酶两者都 有(Dell，Italia等，Curr Opin Cardiol 2003 17: 374-379)。尽管糜酶确切的病理生理作用仍有待确定，但是已经发现其参与 微血管渗漏、嗜中性粒细胞积聚、粘液分泌的刺激以及细胞因子的调 节等方面。有效的糜酶选择性抑制剂可能适用于肥大细胞介导的疾 病，如孝喘、肺部炎症和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。因为糜酶可以在 心脏和血管壁的血管紧张素II的生成中起作用，因此糜酶抑制剂可能 在作为血管壁损伤和炎症(动脉粥样硬化/再狭窄)以及心脏肥大的抗高 血压治疗方面具有潜在的应用。糜酶是心血管疾病治疗的靶标 (Doggrell等，Can J Physiol Pharmacol. 2005 Feb; 83(2): 123-30)。另夕卜， 已经提出糜酶在诸如类风湿性关节炎(Kobayashi等，Jpn J Pharmacol. 2002 Sep; 90(1):7-11)、糖尿病性肾病(Huang等，J Am Soc Nephrol. 2003 Jul; 14(7):1738-47)以及炎性疾病(Muto等，Idrugs.， 2002, 12， 1141-50) 之类的疾病中起重要作用。因此，设计用以抑制糜酶的生物活性的化合物可以在多个疾病领域中提供治疗效果。已经研发了选择性糜酶抑制剂，包括TY-51076、 SUN-C8257、 BCEAB、 NK320和TEI-E548 (参见Doggrell等，出处同 上)。这些糜酶抑制剂在心肌梗塞、心肌病和心动过速诱发的心力衰竭 等的动物模型中已取得极具前景的结果。为了有利于糜酶抑制剂在人 体进行试验，以及一般情况下人体内糜酶活性的研究，需要开发人体 内糜酶活性的生物标记。
技术实现思路
本专利技术发现了人糜酶在特异性位点裂解人SLPI,并且发现这种裂 解可用作糜酶活性的指示剂。当试验一系列已知与SLPI相互作用的 蛋白酶(包括类胰蛋白酶、组织蛋白酶G、弹性蛋白酶和蛋白酶3)时， 这种裂解是糜酶特异性的。在一个一般方面，本专利技术提供了检测人受试者的糜酶相关疾病的 方法，该方法包括以下步骤a)从人受试者获得生物样品；b)测量该 生物样品中人糜酶裂解人SLPI的水平；和c)将步骤b)所测水平与在 健康人受试者中人糜酶裂解人SLPI的对照水平相比较，其中人糜酶 裂解人SLPI的水平与所述对照相比升高表明所述人受试者患有糜酶 相关疾病或患糜酶相关疾病的风险增加。在另 一个一般方面，本专利技术提供了评价治疗人患者的糜酶相关疾 病的效果的方法，该方法包括以下步骤a)从人患者获得生物样品； b)测量在所述生物样品中人糜酶裂解人SLPI的水平；和c)将步骤b) 所测水平与人患者治疗前人_糜酶裂解人SLPI的对照水平相比较，其 中人糜酶裂解人SLPI的水平与所述对照相比P争低表明对所述患者的 糜酶相关疾病的所述治疗是有效的。本专利技术还提供了一种测量人糜酶生物活性的方法，该方法包括以 下步骤a)使人糜酶与人SLPI在测定混合物中接触；b)在所述人糜酶 裂解所述人SLPI的条件下孵育所述测定混合物；和c)测量所述测定 混合物中人糜酶裂解人SLPI的水平。 本专利技术还提供了 一种鉴定降低人糜酶生物活性的化合物的方法，该方法包括以下步骤a)使试验化合物与人糜酶和人SLPI在测定混合 物中接触；b)在所i^A糜酶裂解所逸人SLPI的条件下孵育所述测定混 合物；c)测量所述测定混合物中人糜酶裂解人SLPI的水平；和d)将步 骤c)检测的水平与从对照的检测水平相比较，在对照中，所述测定混 合物中未包含所述试-验化合物。另外，本专利技术还提供了与本专利技术的方法相关的试剂盒。 本专利技术的另 一 方面是一种篩分具有更好机会响应涉及糜酶抑制 剂的治疗的患者的方法，该方法包括以下步骤a)从患者获得生物样 品；b)测量所述生物样品中人糜酶裂解人SLPI的水平；和c)将步骤 b)所测水平与健康人受试者中人糜酶裂解人SLPI的对照水平相比较， 其中人糜酶裂解人SLPI的水平与所述对照相比升高表明所述患者具 有更好机会响应涉及糜酶抑制剂的治疗。根据以下的公开，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测人受试者的糜酶相关疾病的方法，包括以下步骤：　ａ．从所述人受试者获得生物样品；　ｂ．测量所述生物样品中人糜酶裂解人ＳＬＰＩ的水平；和　ｃ．将步骤ｂ）所测水平与健康人受试者的人糜酶裂解人ＳＬＰＩ的对照水平相比较，其中人糜酶裂解人ＳＬＰＩ的水平与所述对照相比升高表明所述人受试者患有糜酶相关疾病或患糜酶相关疾病的风险增加。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S贝尔科夫斯基，MR德安德里，
申请(专利权)人：詹森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]