检测核酸片段长度的方法技术

一种检测核酸片段长度的方法，包括：将待检测核酸稀释至预定浓度；分别取等量体积的核酸与梯度倍数用量的磁珠结合；通过磁力装置吸附结合了核酸的磁珠，并去除上清；使用等量体积的洗脱缓冲液回溶磁珠上结合的核酸，并检测回溶核酸浓度；计算核酸与磁珠结合前后的浓度差异，并形成浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的曲线关系；将曲线关系与标准品曲线进行比对得到待检测核酸的片段长度，其中标准品曲线包括预定浓度的不同片段长度的核酸标准品与梯度倍数用量的磁珠结合前后的浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的对应关系。本发明专利技术的方法基于同种磁珠不同浓度倍数对核酸片段偏向性筛选的特性，结合数据分析对核酸片段的长度进行简易高效的检测。

Methods for detecting the length of nucleic acid fragments

【技术实现步骤摘要】
检测核酸片段长度的方法
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种检测核酸片段长度的方法。
技术介绍
一直以来，核酸片段长度都是采用核酸电泳的方法检测，其原理基本是：带电荷的物质(核酸)在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳是进行核酸研究的重要手段，是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行，浓度不同的琼脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子筛网孔大小不同的凝胶，可用于分离不同分子量的核酸片段。琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物。将琼脂糖在所需缓冲液中加热熔化成清澈、透明的溶胶，然后倒入胶模中，凝固后将形成一种固体基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。将凝胶置于电场中，在中性pH值下带电荷的核酸通过凝胶网孔向阳极迁移，迁移速率受到核酸的分子大小、构象、琼脂糖浓度、所加电压、电场、电泳缓冲液、嵌入染料的量等因素影响。在不同条件下电泳适当时间后，大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上，从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶的分离范围较广，用各种浓度的琼脂糖凝胶可分离、纯化200bp-50kb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测核酸片段长度的方法，其特征在于，所述方法包括：/n将待检测核酸稀释至预定浓度；/n分别取等量体积的稀释至预定浓度的核酸与梯度倍数用量的磁珠结合；/n通过磁力装置吸附结合了核酸的磁珠，并去除上清；/n使用所述等量体积的洗脱缓冲液回溶磁珠上结合的核酸，并检测回溶核酸浓度；/n根据所述预定浓度和所述回溶核酸浓度计算核酸与磁珠结合前后的浓度差异，并形成所述浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的曲线关系；/n将所述曲线关系与标准品曲线进行比对得到待检测核酸的片段长度，其中所述标准品曲线包括所述预定浓度的不同片段长度的核酸标准品与所述梯度倍数用量的磁珠结合前后的浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的对应关...

【技术特征摘要】
1.一种检测核酸片段长度的方法，其特征在于，所述方法包括：
将待检测核酸稀释至预定浓度；
分别取等量体积的稀释至预定浓度的核酸与梯度倍数用量的磁珠结合；
通过磁力装置吸附结合了核酸的磁珠，并去除上清；
使用所述等量体积的洗脱缓冲液回溶磁珠上结合的核酸，并检测回溶核酸浓度；
根据所述预定浓度和所述回溶核酸浓度计算核酸与磁珠结合前后的浓度差异，并形成所述浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的曲线关系；
将所述曲线关系与标准品曲线进行比对得到待检测核酸的片段长度，其中所述标准品曲线包括所述预定浓度的不同片段长度的核酸标准品与所述梯度倍数用量的磁珠结合前后的浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的对应关系。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待检测核酸是核酸文库。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预定浓度是0.1~0.3ng/μL，优选0.2ng/μL。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁珠是可吸附核酸的表面具有羧基修饰的磁珠；
优选地，所述磁珠存在于含有聚乙二醇和盐离子的溶液体系中；
优选地，所述盐离子是由氯化钠提供的离子，所述溶液体系中聚乙二醇浓度范围是10%-30%(w/v)，所述氯化钠的浓度范围是0.1-1mol/L。


5.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晨，黄金，田志坚，许振朋，张翅，
申请(专利权)人：武汉华大医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42