一种光调控病毒繁殖系统及构建方法和应用技术方案

本发明专利技术涉及一种光调控病毒繁殖系统，所述系统包括光源与光敏感NSP9降解系统：所述光源能够发射蓝光，且该光源能够调节光调控病毒繁殖系统所需的光照时间、光照强度和光照频率；所述光敏感NSP9降解系统包括光敏感蛋白vhhNB‑Fc和E3泛素连接酶TRIM21。本发明专利技术系统可以通过调整光照条件来调控病毒增殖的的关键性蛋白NSP9的降解，从而调控PRRSV的繁殖，简单高效，便于操纵。

【技术实现步骤摘要】
一种光调控病毒繁殖系统及构建方法和应用
本专利技术属于生物
，尤其是一种利用光调控病毒繁殖系统及构建方法和应用。
技术介绍
猪繁殖和呼吸障碍综合症主要由猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)所引起，每年造成巨大的经济损失，是影响全世界养猪产业的一个重要的病原体。PRRSV可通过多种途径侵入免疫系统，包括调节IL-10，抑制巨噬细胞和树突细胞功能，以及抑制I型干扰素(IFN-α/β)的产生，导致持续的病毒感染。因此研究病毒感染的机制，有效控制PRRSV感染成为当前研究的迫切需求。PRRSV为单股正链RNA病毒，属动脉炎病毒科动脉炎病毒属，有囊膜，囊膜表面有纤突，似球状，直径45～60纳米，它通过受体介导的内吞作用进入宿主，并通过翻译病毒基因组产生病毒结构蛋白与非结构蛋白，在所有的非结构蛋白中，非结构蛋白9(NSP9)具有RNA依赖性RNA聚合酶活性，在病毒基因复制和转录中起关键作用，被认为是抑制病毒增殖的目标。因此，通过调控NSP9的表达可以有效地抑制病毒增殖。通过光来调控病毒增殖，有利于研究病毒繁殖机制，探索更有效的抗病毒方式。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种光调控病毒繁殖系统，其特征在于：所述系统包括光源与光敏感NSP9降解系统：/n所述光源能够发射蓝光，且该光源能够调节光调控病毒繁殖系统所需的光照时间、光照强度和光照频率；/n所述光敏感NSP9降解系统包括光敏感蛋白vhhNB-Fc和E3泛素连接酶TRIM21。/n

【技术特征摘要】
1.一种光调控病毒繁殖系统，其特征在于：所述系统包括光源与光敏感NSP9降解系统：
所述光源能够发射蓝光，且该光源能够调节光调控病毒繁殖系统所需的光照时间、光照强度和光照频率；
所述光敏感NSP9降解系统包括光敏感蛋白vhhNB-Fc和E3泛素连接酶TRIM21。


2.根据权利要求1所述的光调控病毒繁殖系统，其特征在于：所述系统的作用机理为：呼吸障碍综合症病毒通过受体介导的内吞作用进入宿主细胞，并通过翻译病毒基因组产生病毒结构蛋白和非结构蛋白NSP9，光敏感蛋白vhhNB-Fc在蓝光光照条件下驱动表达，通过其vhhNB端识别NSP9蛋白并与之结合，通过Fc端招募E3泛素连接酶TRIM21，经过泛素化-蛋白酶体降解途径，将NSP9蛋白送入蛋白酶体降解；NSP9被降解后，呼吸障碍综合症病毒失去促进病毒基因组转录的关键性蛋白，繁殖能力下降。


3.如权利要求1或2所述的光调控病毒繁殖系统的构建方法，其特征在于：步骤如下：
⑴搭建光控设备作为光源，对感染病毒的细胞进行光照处理，光控设备由蓝光LED阵列与信号发生器组成，由外部电源供电；LED工作模式为：连续、脉冲，发光强度由电源控制；
⑵构建光敏感NSP9蛋白降解系统，该系统包括光敏感蛋白vhhNB-Fc与E3泛素连接酶TRIM21；
所述光敏感蛋白vhhNB-Fc的质粒表达载体的构建：该光控融合蛋白由两部分组成：光响应的转录激活因子表达载体pcDNA3.1(+)-Gal4(65)-VVD-P65AD和转录因子调控表达的融合蛋白Pu5-vhhNB-Fc；
所述pcDNA3.1(+)-Gal4(65)-VVD-P65AD表达质粒的构建步骤如下：
以pcDNA3.1(+)为载体，以XbaI和BamHI为酶切位点，将-Gal4(65)-VVD-P65AD-序列通过分子克隆的方式连接到载体上；
其中，所述-Gal4(65)-VVD-P65AD-序列的氨基酸序列为SEQ.No.1；
所述pU5-vhhNB-Fc质粒表达载体的构建步骤如下：
以pcDNA3.1(+)为载体，以NruI和BamHI为酶切位点，将poly(A)-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王汉杰，郝亚锋，常津，周恩民，杜涛峰，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12