一种湛蓝色荧光蛋白及其构建方法和在蛋白质防晒剂制备中的应用技术

本发明专利技术属于蛋白质构建领域，具体涉及一种湛蓝色荧光蛋白及其构建方法以及它们在蛋白质防晒剂制备中的应用，进一步涉及一种包含该湛蓝色荧光蛋白的防晒剂。一种湛蓝色荧光蛋白，其为以下（a）或（b）的蛋白质：（a）由SEQ ID：NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）在（a）的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有湛蓝色荧光蛋白活性的由（a）衍生的蛋白质。湛蓝色荧光蛋白具有pH不敏感性、光稳定性等特性，发色团能够吸收长波长紫外线（UVA）并释放大于400 nm的荧光，同时芳香族氨基酸含量较高（9.2%），能够吸收中波长紫外线（UVB）并释放UVA，UVA可通过能量共振转移进一步被发色团吸收，因此UFP具有开发成为蛋白类防晒剂的可能。

【技术实现步骤摘要】
一种湛蓝色荧光蛋白及其构建方法和在蛋白质防晒剂制备中的应用
本专利技术属于蛋白质构建领域，具体涉及一种湛蓝色荧光蛋白及其构建方法以及它们在蛋白质防晒剂制备中的应用，进一步涉及一种包含该湛蓝色荧光蛋白的防晒剂。
技术介绍
上世纪六十年代初，Shimomura首次从水母中分离出绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)，此蛋白在高温下稳定(Tm＝78℃)[1]。荧光蛋白(fluorescentprotein，FP)是一类能被特定波长的紫外线激发产生荧光的蛋白，第65、66、67位氨基酸形成发色团[2]。发色团的光学性质由一个与α-螺旋共价结合并埋藏在β-桶状结构内的三肽(残基65-67)的自催化形成[3]。66位的芳香族氨基酸和咪唑啉酮基团的形成与发色团的缀合及其表现的广谱性质密切相关，将66位氨基酸突变成酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸或组氨酸等芳香族氨基酸会强烈影响光谱[4]。通过GFP-Phe66突变获得了一个蓝色的荧光分子(marinefluorescentprotein，UFP，激发峰为355nm、发射峰为42本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种湛蓝色荧光蛋白，其为以下（a）或（b）的蛋白质：/n（a）由SEQ ID：NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；/n（b）在（a）的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有湛蓝色荧光蛋白活性的由（a）衍生的蛋白质。/n

【技术特征摘要】
1.一种湛蓝色荧光蛋白，其为以下（a）或（b）的蛋白质：
（a）由SEQID：NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
（b）在（a）的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有湛蓝色荧光蛋白活性的由（a）衍生的蛋白质。


2.编码权利要求1所述的蛋白质的基因。


3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列为SEQID：NO.1。


4.一种载体，包含权利要求2或3所述的基因。


5.一种转化体，包含权利要求4所述的载体。


6.一种构建权利要求1所述的湛蓝色荧光蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1）利用PCR定点突变的方法获得DNA分子：根据F46L、T65Q、W66F、Q69L、Y145G、H148S及T203V位点，以pETCFP-Cl为模板，利用突变引物进行PCR定点突变；
2）所获DNA分子转化至DH5α，挑菌测序后获得突变基因UFP；
3）pETUFP-Cl和表达载体pET-24a及pHND，分别经限制性内切酶BamHI/EcoRI双酶切后，连接构建pET-24a-UFP和pHND-UFP表达载体，用于表达UFP；
4）将突变质粒转化至BL21（DE3），接种过夜培养的菌液于液体培养基中培养，收集菌体；
5）取裂解液，悬浮菌体，混合均匀后，冰浴超声波破碎菌体，离心收集上清；
6）上清加热处理，进行有机溶剂萃取后透析除去杂质，利用3kD超滤管低速离心浓缩蛋白，根据Bradford法测定UFP蛋白浓度。


7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1）的突变引物PCR序列如下所述：
F46L-F：GACCCTGAAGCTGATCTGCACCACCG
F46L-R：CGGTGGTGCAGATCAGCTTCAGGGTC
T65Q-W66F-F：GTGACCACCCTGCAGTTTGGCGTGCAGTGC
T65Q-W...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙梅好，王慧慧，石蒙蒙，周宏飞，刘杰，
申请(专利权)人：浙江师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33