一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法技术

本发明专利技术公开了一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法。包括KMB‑17细胞的传代与计数、病毒收获液制备、疫苗原液制备、疫苗半成品、成品制备。本发明专利技术首创在细胞工厂中，以人二倍体细胞为基质规模化制备F基因型腮腺炎病毒减毒活疫苗，在保证疫苗安全性和质量稳定性的同时，还能降低生产成本，节约生产时间。与传统的罗氏瓶培养相比，本发明专利技术所需毒种量较小，每批次仅需60～84mL毒种即可获得60000人份的疫苗成品，具有产量大、成本低、质量稳定等优点，对于预防和控制我国流行性腮腺炎的感染和传播具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法
本专利技术属于抗病毒疫苗制备
，具体是涉及一种以细胞工厂为培养容器，并利用人二倍体细胞(KMB-17株)进行适应性传代培养生长，进而实现规模化制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的方法。
技术介绍
腮腺炎病毒(mumpsvirus，MuV)是引起流行性腮腺炎的病原体。腮腺炎病毒属于副黏病毒科，基因组为不分节段的单负链核糖核酸(RNA)，含有大约15500个核苷酸，在两端序列之间按3′-NP-P-M-F-SH-HN-L-5′的顺序排列着编码7种病毒蛋白的基因。其中，SH基因的变异程度是最大的，因此一般选用SH基因作为分型依据。依据SH抗原上核苷酸的差异，腮腺炎病毒可分为A-L共12个基因型。我国作为一个大量使用腮腺炎减毒活疫苗的地区，但其疫苗毒株除来自国外的成品苗外，主要使用国际通用Jeryl-Lynn株培育得到的S79株，病毒基因型均属于国外流行的A基因型。随着近年来国内在腮腺炎流行毒株方面的分子流行病学分析的深入，目前在我国流行的腮腺炎病毒株主要为F基因型。国内外的研究资料表明，虽然不同基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法，包括以下步骤：/n(1)配制所需的各种试剂和溶液备用：/nMEM培养基：每1000mL MEM培养基含9.4g MEM干粉；/nMEM培养液：每1000mL MEM培养液含有6.6％NaHCO

【技术特征摘要】
1.一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法，包括以下步骤：
(1)配制所需的各种试剂和溶液备用：
MEM培养基：每1000mLMEM培养基含9.4gMEM干粉；
MEM培养液：每1000mLMEM培养液含有6.6％NaHCO330mL，3％谷氨酰胺20mL，新生牛血清100mL和MEM培养基850mL；
MEM维持液：每1000mLMEM维持液含有6.6％NaHCO340mL，3％谷氨酰胺20mL和MEM培养基940mL；
PBS溶液：每1000mLPBS溶液中含有：NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO4·12H202.87g和KH2PO40.2g，以注射用水定容至1000mL，pH为7.3～7.5；
胰蛋白酶消化液：每1000mL胰蛋白酶消化液含有1％NaOH2.5mL，4％EDTA·2Na3.5mL,1％胰蛋白酶125mL和PBS溶液869mL；
冻干保护剂：每1000mL冻干保护剂含有：蔗糖80g、海藻糖80g、甘氨酸20g、右旋糖酐20g、人白蛋白10ml、精氨酸2g和谷氨酸钠1g，以注射用水定容至1000mL；
(2)KMB-17细胞的传代与计数：取复苏好的KMB-17细胞加入胰蛋白酶消化液消化细胞，然后加入预温到37℃的MEM培养液，转入细胞工厂传代培养，在37℃培养4～5d，挑选无污染且生长状态良好的细胞工厂进行计数，细胞总数应不低于3.75×108/细胞工厂；
(3)病毒收获液的制备：弃去细胞工厂中的旧培养液，然后清洗细胞：每个细胞工厂加入1000mLPBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琦涵，王晶晶，刘龙丁，车艳春，李卫东，梁燕，王微，张莹，杨伟，邱恒，杨振清，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53