一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备及其在抗鸡球虫病中的应用方法技术

本发明专利技术公开了一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备方法，制备方法包括：步骤一，VKVQ编码基因的克隆，根据鸡球虫基因序列设计上游引物SEQ ID NO:3和下游引物SEQ ID NO:4,进行PCR扩增、电泳得到一条约1200bp的片段，将该产物连接转化后得到序列全长为1245bp的VKVQ,其序列为SEQ ID NO:1以及后续相关步骤。该方法制备的疫苗通过免疫柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ真核表达质粒和原核表达蛋白，能有效控制鸡体感染柔嫩艾美耳球虫，大大降低养鸡场抗球虫药的使用量，有效控制鸡球虫病。

【技术实现步骤摘要】
一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备及其在抗鸡球虫病中的应用方法
本专利技术涉及兽用生物制品
，更具体的说，涉及一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备及其在抗鸡球虫病中的应用方法。
技术介绍
柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella,E.tenella)是一类专性细胞内寄生的顶复门原虫，可引起严重危害集约化养鸡业生产的鸡球虫病。在无预防措施或预防失败(如因抗药性问题致药物无效)的情况下，鸡发病率可达30％-100％，致死率可高达80％。全球每年因鸡球虫病引起的经济损失超过30亿美元以上。目前对鸡球虫病的防控仍主要是执行“在饲料中添加各种抗球虫药进行药物防控”和“活卵囊疫苗进行疫苗防控”的技术方法。但鸡球虫广泛而严重的抗药性，以及活卵囊疫苗存在的潜在散毒风险使鸡球虫病的防控面临严峻挑战，新的抗球虫药物及疫苗研制成为亟待解决的问题。然而，人们至今对球虫与宿主细胞的详细互作机制尚无系统认识，造成新型抗球虫药物及分子疫苗的研制面临巨大困难。顶膜抗原(ApicalMembraneAntigen，AMA)是一种在顶复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备方法，其特征在于：制备方法包括：/n步骤一，VKVQ编码基因的克隆，根据鸡球虫基因序列设计上游引物SEQ ID NO:3和下游引物SEQ ID NO:4,进行PCR扩增、电泳得到一条约1200bp的片段，将该产物连接转化后得到序列全长为1245bp的VKVQ,其序列为SEQ ID NO:1；/n步骤二，VKVQ真核质粒的制备，针对目的基因设计引物序列，上游引物SEQ ID NO:5和下游引物SEQ ID NO:6，通过PCR扩增、电泳得到PCR产物，回收目的片段并进行酶切反应，通过表达载体的处理以及酶切载体与酶切片段的连接构建VKVQ重组真核表达...

【技术特征摘要】
1.一种柔嫩艾美耳球虫重组多肽疫苗VKVQ的制备方法，其特征在于：制备方法包括：
步骤一，VKVQ编码基因的克隆，根据鸡球虫基因序列设计上游引物SEQIDNO:3和下游引物SEQIDNO:4,进行PCR扩增、电泳得到一条约1200bp的片段，将该产物连接转化后得到序列全长为1245bp的VKVQ,其序列为SEQIDNO:1；
步骤二，VKVQ真核质粒的制备，针对目的基因设计引物序列，上游引物SEQIDNO:5和下游引物SEQIDNO:6，通过PCR扩增、电泳得到PCR产物，回收目的片段并进行酶切反应，通过表达载体的处理以及酶切载体与酶切片段的连接构建VKVQ重组真核表达质粒，再通过连接产物转化、菌落PCR法鉴定转化克隆以及通过阳性克隆测序验证，最后通过质粒小提试剂盒进行质粒小提以及进行VKVQ真核质粒的表达验证；
步骤三，VKVQ蛋白的制备，针...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚南山，孙铭飞，廖申权，吕敏娜，吴彩艳，李娟，林栩慧，胡俊菁，蔡海明，肖文婉，于林增，张健騑，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44