高品质重楼药材的炮制工艺制造技术

本发明专利技术公开了高品质重楼药材的炮制工艺，涉及滇重楼炮制领域，本发明专利技术包括接种块制备、低龄块茎打孔，富集接种培养，切片干制等步骤，本发明专利技术将滇重楼内生菌在低龄滇重楼块茎内进行人工原位富集培养，促进低龄滇重楼块茎内的皂苷活性物质快速富集，有效提高了低龄滇重楼块茎内的皂苷含量，提升药用价值，大幅缩短了滇重楼药材的生产周期。

【技术实现步骤摘要】
高品质重楼药材的炮制工艺
本专利技术涉及滇重楼炮制领域，特别涉及高品质重楼药材的炮制工艺。
技术介绍
滇重楼为百合科重楼属植物云南重楼的干燥根茎，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效。其主要的活性成分为重楼皂苷，约占总化合物数目的80％，但重楼皂苷含量不仅受地理环境、土壤和气候的影响而存在差异，不同的加工炮制方法同样会影响重楼皂苷含量。滇重楼中有益内生菌可与宿主植物产生互利效应，宿主植物因此受到很多影响，包括能产生甾体皂苷类化合物、增强滇重楼的抗病能力、抵御生长环境胁迫能力、提高滇重楼产率、转化或修饰滇重楼中活性次生代谢产物。王茜等的研究显示：从滇重楼块茎、根、叶中分离得到749株内生真菌，分别归属于41个属，其中尖孢镰刀菌、粘鞭霉属和曲霉属能产甾体皂苷的活性菌[GUOLD,HYDEKD,LIEWEC.DetectionandtaxonomicplacementofendophyticfungiwithinfrondtissuesofLivistonachinensisbasedonrDNAsequences[J].MolecularPhylogeneticsandEvolution,2001,20(1):1.DOI:10.1006/mpev.2001.0942.]；也有研究显示，重楼内生菌能够促进滇重楼甾体皂苷的积累[李艳冰,刘涛,林亮,etal.促进滇重楼皂苷类活性成分积累的内生真菌筛选[J].云南农业大学学报:自然科学版,2019.]。近年来随着滇重楼药用价值的深度开发利用，药用范围不断扩大，现有药源已远不能供应市场需求。野生资源有限加之生长周期较长，地下块茎的生长速度十分缓慢，需历经多年的生长累积，才能使种子生长为具有药用价值的成苗。因此，如何扩大药用滇重楼的产能及品质成为当务之急。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：如何利用重楼内生菌提高低龄滇重楼块茎中的活性皂苷含量，进而炮制获得高皂苷含量的重楼饮片。为解决上述技术问题，本专利技术提供以下的技术方案：高品质重楼药材的炮制工艺，包含如下具体步骤：(1)将新鲜的2～4年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，外部彻底消毒后备用；(2)将十年生的滇重楼块茎消毒切块后，无菌条件下接种于PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上打若干接种孔，将内生菌接种块填入接种孔中，无菌滤纸贴合封闭孔口；(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于恒温恒湿黑暗环境下无菌培养15～50天得富集块茎；(5)将富集块茎切片后直接脱水干制即得重楼饮片。优选地，所述步骤(1)和(2)中的消毒步骤具体为：采用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，100～200ppm次氯酸钠浸泡消毒4min,无菌水冲洗4次，接着用无菌水浸泡30min，后用100～200ppm次氯酸钠消毒处理2min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干水分待用。优选地，所述PDA培养基为含150mg/L的硫酸链霉素和150mg/L盐酸四环素的双抗PDA培养基。优选地，所述步骤(2)中将消毒处理后的块茎用解剖刀切成3cm见方的正方体，置于PDA培养基平板内，28℃，培养4～8d，待正方体上及周边长满菌丝后，在正方体边缘切取柱状块。优选地，所述柱状块和接种孔的直径相当，直径均在0.2～1cm。优选地，所述脱水干制的方法为冻干，烘干或晒干中的一种，脱水至水分低于10％即得干品。本专利技术获得的有益效果：将滇重楼内生菌在低龄滇重楼块茎内进行人工原位富集培养，促进低龄滇重楼块茎内的皂苷活性物质快速富集，有效提高了低龄滇重楼块茎内的皂苷含量，提升药用价值，大幅缩短了滇重楼药材的生产周期。具体实施方式下面通过对实施例的描述，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本专利技术的专利技术构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。实施例1：按如下方法制备高皂苷含量的滇重楼饮片：高品质重楼药材的炮制工艺，包含如下具体步骤：(1)将移栽后2年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，块茎外部采用75％(V/V)乙醇水溶液浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，100ppm次氯酸钠浸泡消毒4min,无菌水冲洗4次，接着用无菌水浸泡30min，后用100ppm次氯酸钠消毒处理2min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干水分待用；(2)将十年生的滇重楼块茎采用上述方法消毒处理后，用解剖刀切成3cm见方的正方体，置于PDA培养基平板内，28℃，培养4d，待正方体上及周边长满菌丝后，在正方体边缘切取柱状块无菌条件下接种于含150mg/L的硫酸链霉素和150mg/L盐酸四环素的双抗PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上均匀打1个接种孔，接种孔的数量可依据块茎的大小进行调整，大块多打孔，小块少打孔，所述柱状块和接种孔的直径相当，直径均在0.2cm，将内生菌接种块填满接种孔，无菌滤纸贴合封闭孔口；(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于26℃，40％湿度的恒温恒湿黑暗环境下无菌培养15天得富集块茎；(5)将富集块茎切片后直接-70℃冻干即得脱水至水分低于10％即得干品重楼饮片。实施例2：按如下方法制备高皂苷含量的滇重楼饮片：高品质重楼药材的炮制工艺，包含如下具体步骤：(1)将移栽后4年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，块茎外部采用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，200ppm次氯酸钠浸泡消毒4min,无菌水冲洗4次，接着用无菌水浸泡30min，后用200ppm次氯酸钠消毒处理2min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干水分待用；(2)将十年生的滇重楼块茎采用上述方法消毒处理后，用解剖刀切成3cm见方的正方体，置于PDA培养基平板内，28℃，培养8d，待正方体上及周边长满菌丝后，在正方体边缘切取柱状块无菌条件下接种于含150mg/L的硫酸链霉素和150mg/L盐酸四环素的双抗PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上均匀打5个接种孔，所述柱状块和接种孔的直径相当，直径均在1cm，将内生菌接种块填满接种孔，无菌滤纸贴合封闭孔口；(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于26℃，40％湿度的恒温恒湿黑暗环境下无菌培养50天得富集块茎；(5)将富集块茎切片后直接晒干，脱水至水分低于10％即得干品重楼饮片。实施例3：按如下方法制备高皂苷含量的滇重楼饮片：高品质重楼药材的炮制工艺，包含如下具体步骤：(1)将移栽后3年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，块茎外部采用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，150ppm次氯酸钠浸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高品质重楼药材的炮制工艺，其特征在于，包含如下具体步骤：/n(1)将新鲜的2～4年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，外部彻底消毒后备用；/n(2)将十年生的滇重楼块茎消毒切块后，无菌条件下接种于PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；/n(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上打若干接种孔，将内生菌接种块填入接种孔中，无菌滤纸贴合封闭孔口；/n(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于恒温恒湿黑暗环境下无菌培养15～50天得富集块茎；/n(5)将富集块茎切片后直接脱水干制即得重楼饮片。/n

【技术特征摘要】
1.高品质重楼药材的炮制工艺，其特征在于，包含如下具体步骤：
(1)将新鲜的2～4年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，外部彻底消毒后备用；
(2)将十年生的滇重楼块茎消毒切块后，无菌条件下接种于PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；
(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上打若干接种孔，将内生菌接种块填入接种孔中，无菌滤纸贴合封闭孔口；
(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于恒温恒湿黑暗环境下无菌培养15～50天得富集块茎；
(5)将富集块茎切片后直接脱水干制即得重楼饮片。


2.根据权利要求1中所述的高品质重楼药材的炮制工艺，其特征在于：所述步骤(1)和(2)中的消毒步骤具体为：采用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，100～200ppm次氯酸钠浸泡消毒4min,无菌水冲洗4次，接着用无菌水浸泡30min，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢彦，吴哲，
申请(专利权)人：安徽鑫泰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34