靶向α-突触核蛋白的反义寡核苷酸及其用途制造技术

本公开涉及反义寡核苷酸，其靶向细胞中的SNCA mRNA(例如，内含子外显子连接处)，从而导致SNCA蛋白的表达降低。SNCA蛋白的表达降低对于某些医学疾病例如神经障碍的治疗是有益的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向α-突触核蛋白的反义寡核苷酸及其用途对以电子方式提交的序列表的引用在本申请中提交的2019年电子提交序列表(名称：3338_107PC01_SequenceListing_ST25.txt，大小：10,458字节；创建日期：2019年1月10日)的内容通过引用以其整体并入本文。
本公开涉及靶向细胞中α-突触核蛋白(SNCA)转录物的内含子1与外显子2的连接处，导致α-突触核蛋白(SNCA)蛋白表达降低的反义寡聚化合物(ASO)。SNCA蛋白表达的降低能够对大量医学疾病例如多系统萎缩症、帕金森氏病、帕金森氏病痴呆症(PDD)和路易体痴呆有益。
技术介绍
α-突触核蛋白(SNCA)是突触核蛋白家族的成员，是一种主要在神经组织内表达的一种小的可溶性蛋白。参见MarquesO等人，CellDeathDis.19:e350(2012)。它在许多细胞类型中表达，但主要位于神经元的突触前末端。尽管尚未完全阐明其精确功能，但已显示SNCA在突触传递的调节中起重要作用。例如，SNCA在SNARE复合物的形成中充当分子伴侣，其介导突触小泡与神经元的突触前膜的对接。SNCA还可以与其他蛋白质相互作用(例如与微管相关的蛋白tau)，它有助于稳定微管并调节囊泡运输。由于SNCA在突触传递的调节中的作用，SNCA表达和/或功能的改变可破坏关键的生物学过程。人们认为这种破坏会导致α-共核蛋白病，这是特征在于SNCA蛋白聚集体在脑内异常积聚的神经退行性疾病。因此，错误折叠、聚集和磷酸化的SNCA蛋白的不溶性内含物是诸如帕金森氏病(PD)、帕金森氏病痴呆症(PDD)、路易体痴呆症(DLB)和多系统萎缩症(MSA)等疾病的病理标志。参见GalvinJE等人，ArchivesofNeurology58:186-190(2001)；和ValeraE等人,JNeurochem139Suppl1:346-352(2016年10月)。α-共核蛋白病，例如帕金森氏病，是高度流行的进行性神经退行性脑疾病，特别是在老年人中。参见RecchiaA等人，FASEBJ.18:617-26(2004)。据估计，全世界大约有七百万至一千万人患有这种疾病，仅在美国每年就有约60,000例新病例。一个人的药物治疗费用很容易超过每年2500美元，每位患者的治疗性手术费用高达100,000美元。因此，迫切需要更有力和更具成本效益的治疗选择。
技术实现思路
本公开涉及反义寡核苷酸(ASO)，其包含AtTcctttacaccACAC(SEQIDNO:4)的连续核苷酸序列，基本上由其组成或由其组成，其中大写字母是β-D-氧基-LNA并且小写字母是DNA。在其它实施方案中，ASO包含选自以下的核苷酸间连接：磷酸二酯键、磷酸三酯键、甲基磷酸酯键、氨基磷酸酯键、硫代磷酸酯键及其组合。在某些实施方案中，核苷酸间连接为硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，ASO包含以下，基本上由以下组成或由以下组成：OxyAsDNAtsOxyTsDNAcsDNAcsDNAtsDNAtsDNAtsDNAasDNAcsDNAasDNAcsDNAcsOxyAsOxyMCsOxyAsOxyMC，其中OxyA、OxyT和OxyMC分别是腺嘌呤β-D-氧基-LNA、胸腺嘧啶βD-氧基-LNA和甲基胞嘧啶βD-氧基-LNA，且其中DNAt、DNAc和DNAa分别是胸腺嘧啶DNA、胞嘧啶DNA和腺嘌呤DNA。在一些实施方案中，本公开的ASO包含分子式C171H214N56O90P16S16和如图1B所示的结构，其中M+是抗衡离子。在一些实施方案中，抗衡离子选自H+、Na+、NH4+以及它们的任何组合。在某些实施方案中，抗衡离子是Na+。本公开还提供了包含本文所公开的ASO的缀合物，其中所述ASO共价附接到至少一个非核苷酸或非多核苷酸部分。在一些实施方案中，非核苷酸或非多核苷酸部分包含蛋白质、脂肪酸链、糖残基、糖蛋白、聚合物或其任何组合。本文还提供了药物组合物，其包含本文公开的ASO或缀合物以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该组合物还包含治疗剂。在某些实施方案中，治疗剂是α-突触核蛋白拮抗剂。在一些实施方案中，α-突触核蛋白拮抗剂是抗α-突触核蛋白抗体或其片段。本公开进一步提供了试剂盒，其包含本文所公开的ASO、缀合物或组合物。还公开了一种诊断试剂盒，其包含本公开的ASO、缀合物或组合物。本公开还涉及抑制或降低细胞中SNCA蛋白表达的方法，该方法包括将本文所公开的ASO、缀合物或组合物施用至表达SNCA蛋白的细胞，其中细胞中SNCA蛋白的表达在施用后被抑制或降低。在一些实施方案中，ASO在施用后抑制或降低细胞中SNCAmRNA的表达。在某些实施方案中，与未暴露于ASO的细胞相比，SNCAmRNA的表达在施用后降低至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。在其他实施方案中，与未暴露于ASO的细胞相比，ASO在施用后使细胞中SNCA蛋白的表达降低至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％。在一些实施方案中，细胞是神经元。本文提供了在有此需要的受试者中治疗突触核蛋白病的方法，其包括施用有效量的本公开的ASO、缀合物或组合物。在一些实施方案中，突触核蛋白病选自帕金森氏病、帕金森氏病痴呆症(PDD)、多系统萎缩症、路易体痴呆症及其任何组合。本文还提供了本公开的ASO、缀合物或组合物在制备药物中的用途。本公开还提供了ASO、缀合物或组合物在制备用于治疗有此需要的受试者中的突触核蛋白病的药物中的用途。在一些实施方案中，本公开的ASO、缀合物或组合物用于治疗有此需要的受试者中的突触核蛋白病。在其他实施方案中，本公开的ASO、缀合物或组合物用于治疗。在一些实施方式中，受试者是人。在一些实施方案中，ASO、缀合物或组合物经口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、局部或心室内施用。附图说明图1A示出了ASO-005459的连续核苷酸序列。OxyA、OxyT和OxyMC分别是腺嘌呤βD-氧基-LNA、胸腺嘧啶βD-氧基-LNA和甲基胞嘧啶βD-氧基-LNA；DNAt、DNAc和DNAa分别是胸腺嘧啶DNA、胞嘧啶DNA和腺嘌呤DNA；并且s是硫代磷酸酯键。图1B示出了本文公开的ASO-005459的分子结构。所提供的结构具有分子式C171H214N56O90P16S16，并且每个M+是药学上可接受的抗衡离子诸如H+、Na+或NH4+。图2A和2B显示了ASO-005459对分离自A53T-PAC转基因小鼠的原代神经元中的SNCA和微管蛋白(Tub)蛋白表达的影响。用10点滴定的ASO-005459处理神经元，并测量SNCA和微管蛋白的量。显示了α-Syn/Tub比率的抑制百分比(图2A)和Tub水平的抑制百分比(图2B)。每个数据点代表一个单独的重复。图3显示了ASO-005459对人神经元中SNCA(圆圈)、蛋白S(α)(PROS1(正本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反义寡核苷酸(ASO)，其包含AtTcctttacaccACAC(SEQ ID NO:4)的连续核苷酸序列、基本上由AtTcctttacaccACAC(SEQ ID NO:4)的连续核苷酸序列组成或由AtTcctttacaccACAC(SEQ ID NO:4)的连续核苷酸序列组成，其中大写字母为β-D-氧基-LNA，并且小写字母为DNA。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180112 US 62/616,9371.一种反义寡核苷酸(ASO)，其包含AtTcctttacaccACAC(SEQIDNO:4)的连续核苷酸序列、基本上由AtTcctttacaccACAC(SEQIDNO:4)的连续核苷酸序列组成或由AtTcctttacaccACAC(SEQIDNO:4)的连续核苷酸序列组成，其中大写字母为β-D-氧基-LNA，并且小写字母为DNA。


2.根据权利要求1所述的ASO，其包含选自以下的核苷酸间连接：磷酸二酯键、磷酸三酯键、甲基膦酸酯键、氨基磷酸酯键、硫代磷酸酯键及其组合。


3.根据权利要求2所述的ASO，其中所述核苷酸间连接为硫代磷酸酯键。


4.根据权利要求1所述的ASO，其中所述连续核苷酸序列是OxyAsDNAtsOxyTsDNAcsDNAcsDNAtsDNAtsDNAtsDNAasDNAcsDNAasDNAcsDNAcsOxyAsOxyMCsOxyAsOxyMC，其中OxyA、OxyT和OxyMC分别是腺嘌呤β-D-氧基-LNA、胸腺嘧啶βD-氧基-LNA和甲基胞嘧啶βD-氧基-LNA，其中DNAt、DNAc和DNAa分别是胸腺嘧啶DNA、胞嘧啶DNA和腺嘌呤DNA，并且其中s是两个核苷酸之间的硫代磷酸酯键。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的ASO，其包含分子式C171H214N56O90P16S16和如图1B所示的结构，其中M+是抗衡离子。


6.根据权利要求5所述的ASO，其中所述抗衡离子选自H+、Na+、NH4+及其任何组合。


7.根据权利要求6所述的ASO，其中所述抗衡离子是Na+。


8.一种缀合物，其包含权利要求1至7中任一项所述的ASO，其中所述ASO共价附接到至少一个非核苷酸或非多核苷酸部分。


9.根据权利要求8所述的缀合物，其中所述非核苷酸或非多核苷酸部分包含蛋白质、脂肪酸链、糖残基、糖蛋白、聚合物或其任何组合。


10.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的ASO或根据权利要求8或9所述的缀合物和药学上可接受的载体。


11.根据权利要求10所述的组合物，其进一步包含治疗剂。


12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述治疗剂是α-突触核蛋白拮抗剂。


13.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的ASO、根据权利要求8或9所述的缀合物、或根据权利要求10至12中任一项所述的组合物以及使用说明书。


14.一种诊断试剂盒，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的ASO、根据权利要求8或9所述的缀合物、或根据权利要求10至12中任一项所述的组合物以及使用说明书。


15.一种抑制或降低细胞中SNCA蛋白表达的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·E·奥尔森，A·M·卡拉斯，小杰雷·E·梅雷迪思，N·迪韦齐斯，J·K·洛伊，C·J·巴尔迪克，A·潘德里，I·M·麦克唐纳，P·哈格多恩，M·L·詹森，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，哥本哈根罗氏创新中心，
类型：发明
国别省市：美国;US