对可冷诱导的RNA结合蛋白活性进行抑制的肽制造技术

本申请涉及对可冷诱导的RNA结合蛋白活性进行抑制的肽，披露了包含CIRP抑制剂的药物组合物。在此还描述了治疗患有炎性病症的受试者的方法，这些方法包括向所述受试者给予CIRP抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
对可冷诱导的RNA结合蛋白活性进行抑制的肽本申请是申请号为201480064038.3、申请日为2014年9月24日、名称为“对可冷诱导的RNA结合蛋白活性进行抑制的肽”的专利申请的分案申请。相关申请这一申请要求于2013年9月24日提交的美国临时申请号61/881,798的权益。上述申请的全部说明通过引用结合在此。通过引用ASCII文本文件中的内容结合本申请通过引用结合了包含于与其同时提交的以下ASCII文本文件中的序列表：文件名称：32681023001SEQLIST.txt；创建于2014年9月23日，大小11KB。政府支持本专利技术是由美国国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)资助的在资助金RO1HL076179和GM053008下由政府支持进行的。在本专利技术中政府具有一定的权利。专利技术背景炎症是血管组织对有害刺激(如，病原体、受损细胞、或刺激物)的复杂的生物反应。它是生物的一种保护性尝试，以去除有害刺激，并且发起组织的愈合过程。在不存在炎症的情况下，创伤和感染最好情况是更缓慢的愈合，并且组织的渐进性破坏将有碍生物体的存活。然而，未检查出的炎症还可以导致许多疾病。可以将炎症分类为急性或慢性。急性炎症是身体对有害刺激的始初反应，并且通过增加从血液至受损组织的血浆和白细胞的移动来实现。生化事件的级联使炎性应答传播并成熟，其涉及局部的血管系统、免疫系统、和损伤组织内的各种细胞。长期炎症(被称为慢性炎)导致存在于炎症位点的细胞类型的渐进性转变，并且表征为由于炎症过程造成的组织的同时破坏和治愈。由失血量造成的出血性休克和多器官衰竭仍是在医疗和外科重症监护室中具有无法接受的高死亡率的主要死亡原因之一。即使已经研究多种医疗器械和物质来防止循环衰竭并且来减少死亡率，但是仍没有完全成功。类似地，创伤愈合是涉及止血、炎症、修复、和重构的动态的和复杂的过程。在愈合过程中需要多种细胞类型、酶、蛋白和信号分子以协调的方式工作。针对创伤护理存在许多治疗意见，这些治疗意见包括银治疗、负压创伤设备、高压氧、皮肤替代品、先进敷料、和生长因子以及生物创伤产品。尽管有众多现有临床工具，但是仍不能有效治疗和管理慢性创伤。非治愈性创伤仍然是一个显著的临床问题，并且往往导致截肢。具体而言，尽管创伤护理管理存在进步，但是皮肤创伤仍然造成显著的发病率和死亡率。如果患者还患有障碍(如糖尿病或心血管疾病)，那么由外伤造成的急性皮肤创伤可能变成慢性(非治愈性)创伤。患者可能因慢性创伤的并发症(如，创伤感染、脓毒症和脓毒性休克)，连同由长期不活动造成的栓塞事件致死。专利技术概述在一方面，本专利技术是基于如下发现：抑制冷诱导的RNA结合蛋白(CIRP)减弱炎性应答。更确切地，申请已经发现，与未治疗的对照相比，在出血性休克的动物模型中，抑制CIRP减少天冬氨酸转氨酶(AST)、肝脏髓过氧化物酶(MPO)、乳酸、TNF、血清TNF和血清、肺和肝IL-6的水平(图7-8)。此外，抑制CIRP减少出血诱导的死亡率(图6)。基于该发现，披露了用于治疗炎性病症的药物组合物和方法。在一个实施例中，本专利技术是分离的肽，该分离的肽包括Gly-Arg-Gly-Phe-Ser-Arg-Gly-Gly-Gly-Asp(SEQIDNO:12)的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐；或与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐，其中该肽的长度是10至30个氨基酸残基。在另一个实施例中，本专利技术是包括药学上可接受的载体或稀释剂和分离的肽的药物组合物，该分离的肽包括：SEQIDNO:12的氨基酸残基序列，或与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的氨基酸残基序列。在另一个实施例中，本专利技术是治疗患有炎性病症的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的分离的肽，该分离的肽包括SEQIDNO:12的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐，或与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，本专利技术涉及抑制一种或多种CIRP生物活性的方法，该方法包括将CIRP与分离的肽接触，该分离的肽包括SEQIDNO:12氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐，或与分离的肽接触，该分离的肽包括与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐。具体地而言，本申请已经发现了，本专利技术的肽，尤其是分离的肽(包括SEQIDNO:12的序列或与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的残基序列)，有效抑制了CIRP介导的促炎细胞因子释放，然而其他肽对CIRP的生物活性没有这种抑制作用。在另一方面，本专利技术是基于如下发现，CIRP的表达妨碍了愈合过程。调节CIRP表达和/或生物活性提供了创伤治法的新颖的靶标。因此，在一个实施例中，本专利技术是治疗有皮肤创伤的受试者的方法，该方法包括向受试者给予有效量的分离的肽，该分离的肽包括SEQIDNO:12的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐，或包括与SEQIDNO:12具有至少80％同源性的氨基酸残基序列或其药学上可接受的盐。附图简要说明图1是人类CIRP的氨基酸序列的绘图(SEQIDNO:1)。图2A至2D说明，与假性手术(未流血)对照相比，在出血的动物模型中肝、心脏和血液中的CIRP基因的过度表达。图2A和2B是条形图，该条形图示出在动物出血模型中，在肝脏和心脏组织中CIRP表达分别成倍增加。图2C和2D是通过蛋白质印迹法检测的色谱分离的CIRP的照片。图3A和3B是条形图，该条形解释了，在向受伤的动物给予重组CIRP(rCIRP)后天冬氨酸转氨酶(AST，图3A)和丙氨酸氨基转移酶(ALT，图3B)的血中浓度的升高。图4A至4F解释了，在向健康大鼠给予rCIRP后，血液、肝脏和肠道组织中炎性细胞因子TNF和HMGB1的增加。图5A至5D解释了，rCIRP对来自培养的巨噬细胞的刺激细胞因子释放(TNF，IL-6，HMGB1)的时程和作用。图6是一幅图，该图解释了，与未治疗的对照相比，通过在出血的动物模型中添加抗CIRP抗体，存活率增加。图7A至7C是图，这些图解释了，与未治疗的对照相比，在出血动物模型中，给予抗CIRP抗体组合物后血清AST、ALT、乳酸的减少。图8A至8G是图，这些图解释了，与未治疗的对照相比，在出血动物模型中，在给予抗CIRP抗体后，由抗CIRP抗体造成的血清的、肺的和肝的IL-6的减少。在图8G中，通过实验性出血增加了肝髓过氧化物酶(MPO)活性，并且该增加通过给予抗CIRP抗体被逆转，而不是通过对照抗体。图9A是蛋白质印迹法的照片，其检测了取自健康志愿者或患有休克的外科重症监护室(SICU)患者的血清样品中的CIRP的水平。图9B是蛋白质印迹法的照片，其检测了取自大鼠出血后的血清和组织样品中的CIRP水平。图9C示出条形图，这些条形图指示在出血后240min本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的肽或其药学上可接受的盐，其由以下组成：/nGly-Arg-Gly-Phe-Ser-Arg-Gly-Gly-Gly-Asp(SEQ ID NO:12)的十个氨基酸残基序列，其中所述肽任选地由肽键合的羧基末端延伸组成，所述羧基末端延伸依次由以下连续氨基酸中的前一个、前两个、前三个、前四个或前五个组成，所述连续氨基酸为：Arg

【技术特征摘要】
20130924 US 61/881,7981.一种分离的肽或其药学上可接受的盐，其由以下组成：
Gly-Arg-Gly-Phe-Ser-Arg-Gly-Gly-Gly-Asp(SEQIDNO:12)的十个氨基酸残基序列，其中所述肽任选地由肽键合的羧基末端延伸组成，所述羧基末端延伸依次由以下连续氨基酸中的前一个、前两个、前三个、前四个或前五个组成，所述连续氨基酸为：Arg1-Gly2-Tyr3-Gly4-Gly5(SEQIDNO:45)，或者其中所述肽任选地由肽键合的氨基末端延伸组成，所述氨基末端延伸依次由以下连续氨基酸中的前一个、前两个、前三个、前四个或前五个组成，所述连续氨基酸为：Gly5-Gly4-Arg3-Gly2-Arg1(SEQIDNO:46)，或者其中所述肽任选地由所述一至五个氨基酸羧基末端和氨基末端延伸二者组成；和
其中该肽的长度是10个至20个氨基酸残基；其中该肽是直链的肽；以及其中该肽抑制冷诱导的RNA结合蛋白(CIRP)的一种或多种生物活性。


2.如权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中该肽或其药学上可接受的盐抑制CIRP结合至MD2细胞表面受体。


3.如权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中该肽或其药学上可接受的盐抑制CIRP结合至TLR4/MD2复合物。


4.如权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中该肽由如下各项组成：氨基酸残基序列：
Gly-Gly-Arg-Gly-Arg-Gly-Arg-Gly-Phe-Ser-Arg-Gly-Gly-Gly-Asp(SEQIDNO:13)。


5.如权利要求1所述的肽或其药学上可接受的盐，其中该肽由如下各项组成：氨基酸残基序列：
Gly-Arg-Gly-Phe-Ser-Arg-Gly-Gly-Gly-Asp-Arg-Gly-Tyr-Gly-Gly(SEQIDNO:14)。


6.一种药物组合物，包括：
至少一种如权利要求1-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王平，
申请(专利权)人：范因斯坦医学研究院，
类型：发明
国别省市：美国;US