诊断和识别胸痛早期发作的诊断盒制造技术

本发明专利技术公布的诊断用诊验盒是为了评价在患者胸痛发作初期究竟胸痛是否源于心脏，以及将变异性心绞痛和心脏梗塞区别开。该试验盒是由一个为接受和保留患者血液和血清样品的接受器和悬浮于载体上的至少三个单克隆和多克隆抗体。每个抗体与一不同的蛋白相互补，该蛋白是在心肌梗塞早期从心肌中释放的，每个抗体有相应的试剂，后者对每个抗体与相应蛋白反应时作出独立的应答。对试剂作出应答的综合揭示了患者诊断时的状况。（*该技术在2011年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的药板形式的一步诊断试验法，用来作为一种精确、简便、迅速和便携的诊断方法，以判断患者的胸痛是否源于心脏，并在患者胸痛的早期发作时区别出是易变性心绞痛还是心肌梗塞(“MI”)。特别是本药板用酶免疫试验夹层干化学形式同时测定了心脏受损伤时或损伤后血清或血浆中出现的三种不同的物质或标示物的水平。在本专利技术的优选的实施例中，这三个标示物是肌酸激酶(CK)，肌红蛋白和肌浆球蛋白轻链(MLC)。心肌梗塞的紧急诊断取决于内科长征的敏锐性和对患者症状的评估，例如胸痛或胸压迫感，显可能放射到下到臂部，上到颈部，疲劳，要死的感觉，呼吸短促，苍白，皮肤冷湿，外周发绀或数丝状脉。大多数北美的胸痛患者在发作6小时内报告给医生或急诊室。因此，在MI早期阶段进行有效的诊断试验是至关重要的。有数种心脏检查方法用于诊察MI。这些检查方法包括ECG，SGOT/AST，LDH，CK-MB免疫试验和NA乳液肌红蛋白颗粒增强试验。然而还没有用单一酶心脏检查法能使急诊室医生确定胸痛是来自心脏或不是来自心脏的原因。而且只有在确证了是心肌梗塞后，才开始溶解血栓的治疗。这种治疗开始得越早，患者完全康复的可能性就越大或至少使心脏损伤只在最低程度。因此，内科先生确定这种疼痛是心脏性的还是非心脏性的，是至关重要的。心电图(ECG)可用来诊察MI。然而只有心脏受到严重损伤时心电图才能诊断出。ECG的诊断特异性对开始阶段的胸痛只有51%。因此，ECG不适宜用于MI的早期诊察。血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶/天门冬氨酸转氨酶(SGOT/AST)在心肌中有高浓度，是占优势的酶。血清试验测定SGOT水平可用来诊断心肌梗塞。然而，SGOT只在胸痛发作后的大约8-10小时后才开始升高，在24-36小时内达到峰值，5-7天后恢复正常。患者在胸痛早期和紧急处置时SGOT在诊断心肌梗塞上是没有特殊帮助的。SGOT对心肌也不是特异的。已发现许多包含骨骼肌的组织，如肝和肾脏，由于肌肉注射，休克，肝脏病和肝充血时，SGOT被释放，因此这在诊察特异的心脏组织损害上价值不大。乳酸脱氢酶(LDH)在许多组织中浓度很高，这些组织包括心脏，骨骼肌和肝脏，检查血清中LDH的存在的试验被用来诊断心肌梗塞。在五种普通的同型中心脏主要含有LDH1和LDH2。胸痛发作24-36小时后LDH水平开始增高，48-72小时后达峰值，4-8天后回复正常。因此，患者在胸痛早期不能用LDH作为MI的指标。此外对心脏损伤LDH不是特异的，在肺栓塞、溶血，肝充血，肾脏病和骨骼肌损伤时LDH会出现。这种特异性的缺乏降低了LDH作为诊断手段的应用。肌酸激酶(CK)是肌肉组织中的一种酶。CK催化肌酸和三磷酸腺苷(ATP)转变为磷酸肌酸和二磷酸腺苷(ADP)的反应。CK的数个同功酶中的CK-MB在心脏组织中。CK-MB对诊查心肌梗塞是个灵敏的标示物，因为它在心肌组织受损伤时释放出。故而CK-MB存在于受损伤患者的血清之中，附图说明图1说明了患者血清中CK浓度与时间的关系(文献Lee T.H.等(1986)Ann.Intern.Med.105，221-233)。CK-MB免疫试验是诊断心肌梗塞的标准检查法。美国专利No.4900662公布了CK-MB的应用方法，题目是“CK-MM心肌梗塞免疫试验”。Shah在USP4900662中公布了在患者心肌梗塞后测定血清中初始增高的CK-MM-a(CK-MM的异型)浓度和同时测定CK-MM-a和CK-MM-b的方法。用这个方法可提供一种对梗塞的时间的精确估计。该方法包括测定血清中CK-MM-a和CK-MM-b的总浓度和CK-MM-a的浓度，以确定心肌梗塞急性期的时间。公布的试剂包括有CK-MM-a的多克隆抗体和单克隆抗体，这类抗体并不明显地与CK-MB，CK-MM-b或CK-MM-c结合，有抗CK-MM-b抗体，它不会明显地与CK-MB，CK-MM-a或CK-MM-c结合，有抗CK-MM-a+b抗体，它可与CK-MM-a和CK-MM-b结合，但不能明显地与CK-MB或CK-MM-c结合，还包括这些抗体的标记的衍生物，固着这些抗体的不溶性的支持物，以及含有一种或多种这些试剂的药盒。酶标记的和放射性标记的CK试剂特别有用。单独使用CK-MB作为诊断标示物是有些困难的。首先，心肌梗塞发作后只有在6-8小时后CK-MB的血清浓度才增高，而且12小时后才达峰，造成早期紧急诊断和治疗的困难。第二，CK-MB试验必须在实验室中由训练有素的技术员进行。在非城区不易进行这样的试验，结果也不能迅速得的解析，致使延误了诊断，因此，就患者等候诊断的住院费而言，增加了保证机构的负担。第三，CK-MB处于正常骨骼肌组织中，因此，使该试验结果对心脏不够特异，诊断不够肯定。肌红蛋白是位于骨骼肌或心肌细胞膜的邻近的另一种蛋白质。细胞膜的通透性一旦变得异常，例如心脏缺血时的一个可逆状态，肌红蛋白立即被细胞排出。在胸痛发作1.5小时内，在血清中即可检查出肌红蛋白。医学研究团体认为，心肌坏死释放肌红蛋白，因此它是心肌损伤的一个有用的早期标示物。图2说明了血清中肌红蛋白浓度与时间的关系(文献Grenadier E.等(1981)Am.Heart J.105，408-416;Seguin J.等(1988)J.Thorac Car-diovasc Surg.95，294-297)。胸痛发作后2-3小时内若未检查出血清肌红蛋白水平增高，则在确定疼痛原因时可排除急性心肌梗塞。“NA乳液肌红蛋白颗粒增强测定”是检查肌红蛋白的市场有售的药盒。这种检查试验是基于人体体液中存在的抗原与共价链偶联于聚苯乙烯颗粒上的抗肌红蛋白抗体间的反应。把样品、N肌红蛋白试剂、一种除掉非特异性反应的溶液和N反应缓冲液自动地移液到比包池内，温孵12分钟后用浊度法测定光散射，同标准曲线计算肌红蛋白的浓度。放射免疫试验也可测定肌红蛋白，但还有一种无酶联结的免疫吸附剂检验(ELISA)装置也能采用。单用肌红蛋白指标诊断心肌梗塞具有困难性。肌红蛋白不能指出心肌操作的特殊类型，例如心肌梗塞，在像休克、肾脏病，横纹肌溶解和肌病等各样不同的情况下，也可有肌红蛋白存在。此外，血清和血浆中肌红蛋白的浓度通常随年令与性别而变，健康的正常人浓度变化范围很宽，血清浓度高达90ug/l时通常认为是健康人群的高限。因此，对此人可能是正常水平的浓度，对其它人就可能是严重问题的指征，做诊断时要比预料的准确度略差。肌浆球蛋白轻链(MLC)是肌浆球蛋白肌原纤维的整体部分，但其功能尚不清楚，MLC存在于快、慢、心房和心室肌肉之中，已知MLC对心脏缺血非常敏感。心肌坏死后血清中迅速出现MLC，提高的浓度可维持长达10天，图3说明了患者血清中MLC浓度与时间的关系(文献Wang J.等(1989)Clin.Chimica Acta 181，325-336;Jackowski G.，Symmes J.等(1989)Circulation Suppl 11，80，355)。MLC确定溶血栓治疗是否成功也有预后的价值。MLC的浓度越高，预后越差，也表明梗塞越严重。在数天内浓度下降表示患者趋于康复，而高高低低或平台样曲线表明有梗塞趋势需做手术。MLC主要有两本文档来自技高网...

【技术保护点】
在患者胸痛发作早期诊察心肌梗塞的一种诊断试验盒，它包括有一个可容纳和保留患者血液或血清样品的贮存部和一个与血样进行反应的检测装置。该检测装置的组成是，至少有三种悬浮于载体上的单克隆或多克隆抗体，每一种抗体与心肌梗塞早期自心肌释放的各种蛋白之一相互补，以及独自地应与互补的蛋白进行反应的各个抗体的相应的试剂，并把试剂反应的结果综合起来以提示作诊断时患者的心脏状况。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔治杰克夫斯基，
申请(专利权)人：光谱诊断公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]