本发明专利技术公开了可用于制备疫苗的抗体，所述疫苗用于对需要治疗的人进行主动和／或被动免疫。本发明专利技术也提供人类单克隆抗体，它们与ＣＬ１至ＣＬ６细胞系保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心（ＥＣＡＣＣ），ＰＨＬＳ，Ｐｏｒｔｏｎ＿Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，英国）产生的上述抗体是功能等价物。本发明专利技术的还有一个目的是提供产生本文公开和要求保护的任意一种抗体的杂交瘤和或ＣＨＯ细胞系。本发明专利技术进一步涉及本发明专利技术抗体的混合物，以及用单独的抗体或其混合物进行ＨＩＶ－１感染的体外或体内检测、预防和／或治疗。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫学领域，特别涉及HIV-1感染的检测、预防和治疗以及AIDS治疗。更具体地说，它涉及单克隆抗体、由这些抗体制备的药物和疫苗以及在应用这些抗体的基础上形成的方法，用于分析和/或临床应用的药物及疫苗。
技术介绍
在感染有I型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的患者的血清中，在感染一段时间而没有任何明显的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的临床表现时，其血清中可检测到抗病毒的抗体。在主动免疫应答的这一阶段，在循环中预计可出现大量抗原特异性B细胞。这些B细胞可用作融合伙伴来生产抗HIV-1的人单克隆抗体。本专利技术的单克隆抗体按已知的方法制备，例如按R.Kennet等在《单克隆抗体和功能细胞系；进展及应用》(Plenum Press(纽约)，1984)中所描述的。本专利技术中应用的其它材料和方法以已知的方法为依据，如病毒学杂志676642-6647，1993中所描述的。本文所描述的产生单克隆抗体的杂交瘤细胞系CL1至CL6的存活样品保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)，公共卫生实验室设施(the Public Health Laboratory Service，PHLS)，应用微生物学和研究中心，Porton Down，Salisbury SP4 OJG，英国。根据保藏号对它们进行识别CL1-保藏号No.90091704(1990年9月17日保藏)；CL2-保藏号No.93091517(1993年9月15日保藏)；CL3-保藏号No.95032235(1995年3月22日保藏)；CL4-保藏号No.95032236(1995年3月22日保藏)；CL5-保藏号No.95032240(1995年3月22日保藏)；CL6-保藏号No.95032241(1995年3月22日保藏)。此后，当用缩写形式时，这些细胞系产生的相应单克隆抗体记作MAbCL1，MAb CL2至MAb CL6。最近几年人们广泛应用单克隆抗体，尤其是人的单克隆抗体以增加对抗体中和HIV-1的认识，所述抗体是因HIV-1衍生的免疫原的免疫或患者的感染而产生的(病毒学杂志622107-2114，1988；免疫学76515-534，1992；病毒学杂志，676642-6647，1993；US 5087557)。HIV-1在免疫学的压力下可迅速改变形状，逃避患者免疫系统释放的抗体或研究者开发利用的抗体的捕获，对此人们付出了许多努力来克服它的这一有害性能。其结果是目前市场上还没有用于主动或被动免疫的基于抗体的(或其它的)疫苗。当发现HIV-1被膜糖蛋白gp160的小亚基gp41上的一个抗原决定簇(EP 570357A2)时就前进了显著的一步，该抗原决定簇与HIV-1分离物BH10的gp41位于662-667位的氨基酸序列“ELDKWA”一致。作者报道中和HIV-1的人单克隆抗体与该抗原决定簇特异性结合。该抗体被证明是对结合表位和其多样性进行生化分析的有力工具。gp41表位的高度保守状态的发现给找到适于更可靠地预防人类HIV-1感染和/或更有效地治疗HIV-1感染的患者的疫苗组合物带来了希望。EP 570357A2中所报道的结果激励着本专利技术的专利技术人增加他们研究的积极性，最终使他们得到本文公开的新的和创造性的发现。尽管在利用中和HIV-1的单克隆抗体这一领域中取得了有希望的结果，但是在这一途径中至少存在一个主要的缺陷。该缺陷在于广泛使用HIV-1分离物的实验室株，它已适应了实验条件，毒性或多或少都有所减弱，因此如果它有任何代表意义的话也只很少地代表HIV-1初级分离物的特性和行为。因此，当针对实验室HIV-1株产生的疫苗组合物用于对抗如感染者血液样品中的HIV-1初级分离物时通常无效(J.Cohen，科学，262980-981，1993)。第二个主要的缺陷过去是并且现在仍然是HIV-1病毒通过改变形态逃避抗体捕获的能力，这经常使研究者的异常努力几乎无效。这种逃避突变的特征在于靶抗原决定簇中的一个仅有一个或几个氨基酸改变，这可能是自发或诱发突变的结果。专利技术概述因此本专利技术公开了这样一些抗体，它们能克服现有技术的缺点，并且能用于生产给需要主动和/或被动免疫治疗的病人应用的疫苗。本专利技术还提供人类单克隆抗体，它们在功能上与上述由CL1至CL6中任何一种细胞系所产生的抗体相同。本专利技术还有一个目的是提供杂交瘤和/或CHO细胞系，它们产生本文公开和要求保护的任何一种抗体。本专利技术还涉及本专利技术的抗体的混合物，以及体外和体内应用单个抗体或其混合物预防和/或治疗HIV-1感染，和/或改进的检测HIV-1感染的方法。细胞系CL1至CL4产生的单克隆抗体识别HIV被膜糖蛋白，尤其是gp160的特异性抗原决定簇。CL1至CL4抗体识别并结合gp41/gp160的一段氨基酸序列，该序列与HIV-1分离物BH10的gp41位于662至667(“ELDKWA”)位的表位一致(GenBank保藏号M15654；Swissprot数据库登记号为ENV$HIV10)。CL2和CL3的单克隆抗体与两个不同的抗原决定簇结合，更具体而言，是与gp120/gp160的片段结合，而该片段与分别位于HIV-1分离物BH10(GenBank保藏号M15654；Swissprot数据库登记号为ENV$HIV10)的加工过的gp120的79至184和326至400的表位序列一致。尽管由CL1至CL4产生的独特型抗体是针对HIV-1病毒的体外和体内捕获和中和的，但由CL5和CL6所释放的抗独特型抗体却起着相反的作用，即它们模拟病毒，更具体而言，它们模拟HIV-1病毒的相应抗原决定簇。CL5和CL6的抗独特型抗体具有这样的性质，即它们如病毒自身一样，基本上在gp160的同一位置(抗原决定簇)与CL2的独特型抗体结合。本专利技术一些实施方案的详述当为了发现新的抗HIV-1抗体而进行实验时，专利技术人发现在体外能有效中和HIV-1的人单克隆抗体包括多种初级HIV-1分离物，如HIV-1初级分离物92RW009，92RW021，92UG037，92TH014，92BR030，N70-2，DJ259(全部从用于HIV-1分离和表征的WHO网络获得)，或WYG，WRF，WRB，WSC，WHW(从奥地利病人中分离到的)。奇怪的是，已证明这些抗体识别并与HIV-1糖蛋白gp160的两个不同的抗原决定簇相结合。此外，这些抗体所结合的靶体非常独特。用不同公司、研究所提供的41种不同HIV-1结合抗体组成的混合物进行对比试验，结果显示，混合物中没有一种其它抗体与上面确定出的抗体相竞争，例如与来源于CL2细胞系的人单克隆抗体竞争结合gp120/gp160的目的抗原片段，该片段与HIV-1分离物BH10的gp120的79至184和326至400的氨基酸序列一致。另外，对感染HIV-1的患者的血清和血浆所进行的研究显示在所测验样品中不存在CL2型的抗体。这一发现又一次强调了这些中和HIV-1的人类单克隆抗体的独特性，同时表明，以合适的形式应用这些抗体对人类个体进行预防性和/或治疗性治疗，或许存在抵抗HIV-1感染的特别潜力。本专利技术的另一个实施方案包括这样的CL2型抗体，已发现只有当抗原决定簇以糖基化形式存在时，它才与上述gp12本文档来自技高网...
【技术保护点】
中和ＨＩＶ－１的人类单克隆抗体，其特征在于它与ＨＩＶ－１的两个不同的抗原决定簇结合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：H卡特英格，A布克阿谢尔，W埃尔内斯特，C鲍尔昂，M珀特谢尔，A特里科拉，R普雷德尔，C谢马特茨，A克利马，F施泰因德尔，T穆斯特尔，
申请(专利权)人：波利门科学生物免疫研究有限公司，
类型：发明
国别省市：AT[奥地利]
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